Gitelman綜合征分子發(fā)病機制的研究及臨床分析.pdf

1、Gitelman綜合征是常染色體隱性遺傳病（OMIM263800），是腎單位遠曲小管重吸收NaCl障礙造成的原發(fā)腎性失鹽性疾病，臨床特征表現(xiàn)為正?；蚱偷难獕?，腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)激活以及低氯性堿中毒、低血鉀、低血鎂和低尿鈣。Gitelman綜合征常是由位于染色體16q13的SLC12A3基因失活突變引起的，該基因編碼噻嗪類利尿劑敏感的離子通道—鈉、氯共同轉運子（Na-Cl Cotransportor, NCCT）。目前已發(fā)現(xiàn)1

2、00余個SLC12A3基因突變位點可能與Gitelman綜合征有關，包括錯義突變、剪切突變、無義突變、讀碼框位移突變以及起始密碼子突變等，其中復合雜合突變多于純合子突變，無熱點突變發(fā)現(xiàn)。Gitelman綜合征在表型上與經典型Bartter綜合征存在一定的重疊和交叉，少數(shù)SLC12A3突變的病人出現(xiàn)類似Bartter綜合征的表型，也有少數(shù)表型類似Gitelman綜合征的患者是由經典型Bartter綜合征相關基因CLCNKB突變引起的。氯離

3、子清除試驗和基因診斷可幫助鑒別之。目前國內尚無Gitelman綜合征致病基因的研究及較大組患者臨床表型的分析。本課題重點研究中國Gitelman綜合征患者SLC12A3基因突變特點并對其臨床表型進行分析。 本研究第一部分選取2001-2006年本院住院診斷為Gitelman綜合征或Bartter綜合征的26例病人，其中男性16人，女性10人，平均年齡35±14歲，分別來自21個不同的家系，2例患者來自近親結婚家系。其中一例患者進

4、行了氯離子清除試驗并觀察對襻利尿劑和噻嗪類利尿劑的反應。該患者氯離子的清除率（CCl）為2.17ml/min,遠端小管的重吸收率(DFC)為76.1％，應用呋噻米后CCl顯著增加，DFC顯著減少，而雙氫克尿噻無明顯效應。氯離子清除試驗證實患者腎遠曲小管存在重吸收功能障礙而髓襻升枝粗段重吸收功能正常，支持Gitelman綜合征的診斷。在基因分析中，通過PCR擴增SLC12A3和CLCNKB基因所有編碼區(qū)和兩側內含子邊界，直接測序尋找突變位

5、點。序列分析懷疑存在雜合缺失或插入突變時，PCR產物亞克隆于pGEM-Teasy質粒并擴增，采用質粒通用引物T7/SP6測序。RT-PCR驗證剪切突變。我們共確定分布于SLC12A3基因19個突變位點。12個是新發(fā)現(xiàn)突變位點，其中包括7個錯義突變：Gly196Val, Thr339Ile, Asn359Lys, Tyr386Cys，Cys430Gly, Gly439Val和Leu571Pro; 2個缺失突變：1384delG & 346

6、-353delACTGATGG, 1個復合缺失+插入突變：492-496delTACGGinsA，一個非移碼插入突變：997insCys和1個導致剪切突變的置換突變：Del n7426-n7438（GCGGACATTTTTG）& Ins(ACCGAAAATTTT) 。7個已報道過的突變，其中包括6個錯義突變：Thr60Met, Cys421Phe, Asp486Asn, Arg655His, Arg913Gln & Arg928Cys；

7、一個缺失突變：2883-2884delAG。26個病人中12個病人攜帶Thr60Met純合或雜合突變, 其中來自2個家系的4例患者為純合突變，來自7個家系的8例患者為雜合突變。所有患者無CLCNKB基因突變位點發(fā)現(xiàn)。 本研究第二部分分析了第一部分通過基因診斷確診的26例Gitelman綜合征患者的臨床表型和病理生理特點。26人中，生長發(fā)育遲緩2例，成年后身材矮小2例?；颊叱醮尉驮\的平均年齡為25±11歲?；颊叱醮尉驮\主訴的常見癥

8、狀為肌肉無力（21/26）或痙攣（13/26）。通過調查，患者就診時最常見的癥狀依次是疲勞、肌肉無力、夜尿增多、嗜鹽、煩渴、肌肉痙攣和心悸。但16例患者病程中首先出現(xiàn)的癥狀可能是夜尿和煩渴多飲，14例患者有入學年齡尿床史。實驗室檢查，26例患者全部有低血鉀和堿性尿。25例患者存在低血鎂（<0.65mmol/l），24例患者存在低尿鈣（24小時尿鈣/尿肌酐<0.1mmol/mmol）。6例患者蛋白尿大于150mg/24小時，平均為458±

9、343mg/24小時（n=6）。3例患者腎小球濾過率低于正常，分別為73、64和37ml/min/1.73m2，其中2例患者來自近親結婚家系。男性患者組的鉀離子和氯離子排泄分數(shù)分別為（34.8±23.7）％和（2.36±1.69）％，女性分別為（17.0±4.2）％和（1.23±0.39）％，男女兩組患者差別顯著(P<0.05)。隨訪22例患者中，給予單純替代治療或聯(lián)合安替舒通、消炎痛治療后的血鉀平均水平為2.91±0.33mmol/l

10、，僅4例患者血鉀水平達到正常（4/22）。 總之，通過本研究可得出如下結論：發(fā)現(xiàn)中國人群可能與Gitelman綜合征相關的19個突變位點，其中12個新發(fā)現(xiàn)突變位點；通過對Gitelman綜合征表型、基因突變特點和突變頻率的分析證實Gitelman綜合征并非罕見??；Thr60Met可能是亞洲人Gitelman綜合征患者最常見的突變，是否為熱點突變還需要更多病例的研究證實； Gitelman綜合征通常認為發(fā)病于青春期或成年后，但實際

11、發(fā)病年齡可能通常更早；低血鎂和低尿鈣并非Gitelman綜合征的固定特征；Gitelman綜合征是病情緩和、預后良好的疾病，但有致發(fā)育遲緩和進展至腎功能不全的危險，仍需積極治療；Gitelman綜合征有較大的遺傳異質性，特異的表型和基因型之間的聯(lián)系較難確定，基因診斷和氯離子清除試驗是Gitelman綜合征的診斷金標準。Gitelman綜合征男性患者可能有較女性患者存在更嚴重的臨床表型，性別差異解釋了Gitelman綜合征表型異質性的部分