Gitelman綜合征分子發(fā)病機(jī)制的研究及臨床分析.pdf

1、Gitelman綜合征是常染色體隱性遺傳?。∣MIM263800），是腎單位遠(yuǎn)曲小管重吸收NaCl障礙造成的原發(fā)腎性失鹽性疾病，臨床特征表現(xiàn)為正?；蚱偷难獕?，腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)激活以及低氯性堿中毒、低血鉀、低血鎂和低尿鈣。Gitelman綜合征常是由位于染色體16q13的SLC12A3基因失活突變引起的，該基因編碼噻嗪類(lèi)利尿劑敏感的離子通道—鈉、氯共同轉(zhuǎn)運(yùn)子（Na-Cl Cotransportor, NCCT）。目前已發(fā)現(xiàn)1

2、00余個(gè)SLC12A3基因突變位點(diǎn)可能與Gitelman綜合征有關(guān)，包括錯(cuò)義突變、剪切突變、無(wú)義突變、讀碼框位移突變以及起始密碼子突變等，其中復(fù)合雜合突變多于純合子突變，無(wú)熱點(diǎn)突變發(fā)現(xiàn)。Gitelman綜合征在表型上與經(jīng)典型Bartter綜合征存在一定的重疊和交叉，少數(shù)SLC12A3突變的病人出現(xiàn)類(lèi)似Bartter綜合征的表型，也有少數(shù)表型類(lèi)似Gitelman綜合征的患者是由經(jīng)典型Bartter綜合征相關(guān)基因CLCNKB突變引起的。氯離

3、子清除試驗(yàn)和基因診斷可幫助鑒別之。目前國(guó)內(nèi)尚無(wú)Gitelman綜合征致病基因的研究及較大組患者臨床表型的分析。本課題重點(diǎn)研究中國(guó)Gitelman綜合征患者SLC12A3基因突變特點(diǎn)并對(duì)其臨床表型進(jìn)行分析。 本研究第一部分選取2001-2006年本院住院診斷為Gitelman綜合征或Bartter綜合征的26例病人，其中男性16人，女性10人，平均年齡35±14歲，分別來(lái)自21個(gè)不同的家系，2例患者來(lái)自近親結(jié)婚家系。其中一例患者進(jìn)

4、行了氯離子清除試驗(yàn)并觀察對(duì)襻利尿劑和噻嗪類(lèi)利尿劑的反應(yīng)。該患者氯離子的清除率（CCl）為2.17ml/min,遠(yuǎn)端小管的重吸收率(DFC)為76.1％，應(yīng)用呋噻米后CCl顯著增加，DFC顯著減少，而雙氫克尿噻無(wú)明顯效應(yīng)。氯離子清除試驗(yàn)證實(shí)患者腎遠(yuǎn)曲小管存在重吸收功能障礙而髓襻升枝粗段重吸收功能正常，支持Gitelman綜合征的診斷。在基因分析中，通過(guò)PCR擴(kuò)增SLC12A3和CLCNKB基因所有編碼區(qū)和兩側(cè)內(nèi)含子邊界，直接測(cè)序?qū)ふ彝蛔兾?/p>

5、點(diǎn)。序列分析懷疑存在雜合缺失或插入突變時(shí)，PCR產(chǎn)物亞克隆于pGEM-Teasy質(zhì)粒并擴(kuò)增，采用質(zhì)粒通用引物T7/SP6測(cè)序。RT-PCR驗(yàn)證剪切突變。我們共確定分布于SLC12A3基因19個(gè)突變位點(diǎn)。12個(gè)是新發(fā)現(xiàn)突變位點(diǎn)，其中包括7個(gè)錯(cuò)義突變：Gly196Val, Thr339Ile, Asn359Lys, Tyr386Cys，Cys430Gly, Gly439Val和Leu571Pro; 2個(gè)缺失突變：1384delG & 346

6、-353delACTGATGG, 1個(gè)復(fù)合缺失+插入突變：492-496delTACGGinsA，一個(gè)非移碼插入突變：997insCys和1個(gè)導(dǎo)致剪切突變的置換突變：Del n7426-n7438（GCGGACATTTTTG）& Ins(ACCGAAAATTTT) 。7個(gè)已報(bào)道過(guò)的突變，其中包括6個(gè)錯(cuò)義突變：Thr60Met, Cys421Phe, Asp486Asn, Arg655His, Arg913Gln & Arg928Cys；

7、一個(gè)缺失突變：2883-2884delAG。26個(gè)病人中12個(gè)病人攜帶Thr60Met純合或雜合突變, 其中來(lái)自2個(gè)家系的4例患者為純合突變，來(lái)自7個(gè)家系的8例患者為雜合突變。所有患者無(wú)CLCNKB基因突變位點(diǎn)發(fā)現(xiàn)。 本研究第二部分分析了第一部分通過(guò)基因診斷確診的26例Gitelman綜合征患者的臨床表型和病理生理特點(diǎn)。26人中，生長(zhǎng)發(fā)育遲緩2例，成年后身材矮小2例?；颊叱醮尉驮\的平均年齡為25±11歲?；颊叱醮尉驮\主訴的常見(jiàn)癥

8、狀為肌肉無(wú)力（21/26）或痙攣（13/26）。通過(guò)調(diào)查，患者就診時(shí)最常見(jiàn)的癥狀依次是疲勞、肌肉無(wú)力、夜尿增多、嗜鹽、煩渴、肌肉痙攣和心悸。但16例患者病程中首先出現(xiàn)的癥狀可能是夜尿和煩渴多飲，14例患者有入學(xué)年齡尿床史。實(shí)驗(yàn)室檢查，26例患者全部有低血鉀和堿性尿。25例患者存在低血鎂（<0.65mmol/l），24例患者存在低尿鈣（24小時(shí)尿鈣/尿肌酐<0.1mmol/mmol）。6例患者蛋白尿大于150mg/24小時(shí)，平均為458±

9、343mg/24小時(shí)（n=6）。3例患者腎小球?yàn)V過(guò)率低于正常，分別為73、64和37ml/min/1.73m2，其中2例患者來(lái)自近親結(jié)婚家系。男性患者組的鉀離子和氯離子排泄分?jǐn)?shù)分別為（34.8±23.7）％和（2.36±1.69）％，女性分別為（17.0±4.2）％和（1.23±0.39）％，男女兩組患者差別顯著(P<0.05)。隨訪22例患者中，給予單純替代治療或聯(lián)合安替舒通、消炎痛治療后的血鉀平均水平為2.91±0.33mmol/l

10、，僅4例患者血鉀水平達(dá)到正常（4/22）。 總之，通過(guò)本研究可得出如下結(jié)論：發(fā)現(xiàn)中國(guó)人群可能與Gitelman綜合征相關(guān)的19個(gè)突變位點(diǎn)，其中12個(gè)新發(fā)現(xiàn)突變位點(diǎn)；通過(guò)對(duì)Gitelman綜合征表型、基因突變特點(diǎn)和突變頻率的分析證實(shí)Gitelman綜合征并非罕見(jiàn)??；Thr60Met可能是亞洲人Gitelman綜合征患者最常見(jiàn)的突變，是否為熱點(diǎn)突變還需要更多病例的研究證實(shí)； Gitelman綜合征通常認(rèn)為發(fā)病于青春期或成年后，但實(shí)際

11、發(fā)病年齡可能通常更早；低血鎂和低尿鈣并非Gitelman綜合征的固定特征；Gitelman綜合征是病情緩和、預(yù)后良好的疾病，但有致發(fā)育遲緩和進(jìn)展至腎功能不全的危險(xiǎn)，仍需積極治療；Gitelman綜合征有較大的遺傳異質(zhì)性，特異的表型和基因型之間的聯(lián)系較難確定，基因診斷和氯離子清除試驗(yàn)是Gitelman綜合征的診斷金標(biāo)準(zhǔn)。Gitelman綜合征男性患者可能有較女性患者存在更嚴(yán)重的臨床表型，性別差異解釋了Gitelman綜合征表型異質(zhì)性的部分