P9-ZFD蛋白的表達(dá)、亞細(xì)胞定位及其在MG病因機制中的作用.pdf

1、重癥肌無力(Myasthenia gravis,MG)主要是由乙酰膽堿受體抗體(AChRAb)介導(dǎo)的、細(xì)胞免疫依賴性、補體和多種細(xì)胞因子參與的針對神經(jīng)-肌肉接頭(NMJ)處突觸后膜上乙酰膽堿受體(AChR)的自身免疫性疾病,主要靶器官是骨骼肌.但是,臨床上仍有15％以上的MG患者血清中無法檢測到AChR抗體(SNMG),以及AChR抗體效價的高低也與疾病的嚴(yán)重程度和預(yù)后無絕對的相關(guān)性.另外,血漿交換治療對SNMG患者同樣具有良好的治療效

2、果,將SNMG患者的血清給實驗動物注射后同樣可引起實驗性自身免疫性MG(EAMG).這些結(jié)果均提示,MG確切的免疫病因機制實際上至今仍不完全清楚.病人體內(nèi)必定還存在針對靶器官其它未知抗原表位的自身抗體.由T輔助淋巴細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子通過影響細(xì)胞調(diào)控的免疫反應(yīng)及自身抗體的產(chǎn)生可參與MG的發(fā)病機制.P9基因是近年我們通過DD-PCR技術(shù)篩選獲得的一個MG相關(guān)新基因,經(jīng)同源性對比分析,它與己知基因的同源性不足1％,主要在骨骼肌、胸腺等MG的靶

3、器官組織中表達(dá),并且在伴胸腺增生及胸腺瘤MG患者骨骼肌中mRNA的表達(dá)水平明顯高于對照組患者.該基因全長3442bp,編碼709個氨基酸.考慮到該基因較大,如果對其全長基因進(jìn)行表達(dá)和研究,技術(shù)要求高,難度很大.因此,我們通過InterPro等著名蛋白數(shù)據(jù)庫對P9基因進(jìn)行了檢索分析,發(fā)現(xiàn)它包含了TRAF型鋅指結(jié)構(gòu)域(簡稱P9-ZFD)和F-box二個功能域,以及三個可能的跨膜區(qū).其中的P9-ZFD功能域是一個具有重要功能的銜接子蛋白,它通

4、過在細(xì)胞膜和胞漿部位的表達(dá),其TRAF2區(qū)作為TNF誘導(dǎo)產(chǎn)生的細(xì)胞膜多蛋白受體復(fù)合物(MPRC)的一部分,可偶聯(lián)與TNF-TNFR1信號傳導(dǎo)通路有關(guān)的細(xì)胞因子,影響T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)及間接地調(diào)節(jié)自身抗體的產(chǎn)生.因此,它與MG的病因機制可能具有十分重要的關(guān)系.于是,我們選擇了P9-ZFD這個重要的基因功能段,運用基因工程技術(shù)對其進(jìn)行克隆、表達(dá)和純化,并制備和提純相應(yīng)的多克隆抗體,來進(jìn)一步研究1)MG和非MG患者骨骼肌組織中P9-ZFD蛋