生酮飲食對新生期反復驚厥大鼠干預作用及其機制研究.pdf

1、目的：
　　 探討生酮飲食對三氟乙醚誘導新生大鼠反復驚厥的干預作用及分子機制。
　　 方法：
　　 日齡7天(P7)的Sprague-Dawley(SD)大鼠共40只，隨機分為對照組(NS組)和驚厥組(RS組)，每組各20只。適應性喂養(yǎng)一天后，RS組大鼠吸入三氟乙醚誘導驚厥發(fā)作，反復誘導驚厥持續(xù)30min，每日一次，同樣方法連續(xù)誘導8天；NS組同樣操作但不吸入三氟乙醚。在P21依據(jù)是否給予生酮飲食(KD)干預，每

2、組大鼠再隨機分為兩組，即未驚厥普通飲食組(NS+ND)、未驚厥生酮飲食組(NS+KD)、驚厥普通飲食組(RS+ND)、驚厥生酮飲食組(RS+KD)，每組各10只。NS+ND組和RS+ND組大鼠給予普通飲食，NS+KD組和RS+KD組大鼠給予生酮飲食，飲食干預三周。在KD實行當日、7日、21日每組大鼠尾靜脈采血對其血糖和血酮值進行監(jiān)測。飲食干預期間每隔三天測量并記錄各組大鼠的體重。在P28、P35分別進行兩次神經(jīng)行為測定包括攀金屬網(wǎng)實驗、

3、握力實驗、負向趨地反應實驗；P36行曠場實驗。P43每組各隨機取6只大鼠共24只，斷頭取大腦皮質(zhì)及海馬，用免疫印跡法檢測各組大鼠大腦皮質(zhì)及海馬ZnT-3、PRG-1、bcl-2蛋白的表達。每組各取4只大鼠共16只采用Timm染色法觀測各組大鼠海馬區(qū)苔蘚纖維發(fā)芽情況。
　　 結果：
　　 1、對體重的影響：KD干預三天后，KD組(NS+KD組、RS+KD組)較相應的ND組(NS+ND組、RS+ND組)體重顯著降低（P＜0.

4、05），這種狀態(tài)一直持續(xù)到實驗結束。并且隨著大鼠年齡的增長，ND組大鼠的體重較前逐步增長，而KD組大鼠體重較前逐步的降低。
　　 2、神經(jīng)行為實驗：
　　 (1)攀金屬網(wǎng)實驗顯示：隨著日齡的增長，各組大鼠較前攀金屬網(wǎng)所需時間均縮短。組間比較KD組較相應的ND組攀金屬網(wǎng)所需時間顯著縮短(P＜0.05)。.RS組（RS+ND組與RS+KD組）較相應的NS組(NS+ND組、NS+KD組)攀金屬網(wǎng)所需時間在P28顯著增加（P＜0

5、.05），而在P35無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 (2)握力實驗顯示：隨著日齡的增長，各組大鼠較前握力所維持的時間均縮短。KD組較較相應的ND組握力維持時間延長（P＜0.05），RS組較相應的NS組握力維持時間縮短(P＜0.05)。
　　 (3)負向趨地反應實驗顯示：各組大鼠不同日齡負向趨地反應時間無顯著性差異（P＞0.05）。
　　 (4)曠場實驗顯示：四組大鼠曠場實驗中延遲時間無顯著性差異（P＞0.0

6、5）；RS+KD組比RS+ND組開場得分顯著降低（P＜0.05）；RS+ND組比NS+ND組修飾行為顯著增加(P＜0.05)。
　　 3、Neo-Timm染色：在CA3區(qū)，RS+ND組苔蘚纖維發(fā)芽程度明顯高于NS+ND組（P＜0.05），RS+KD組苔蘚纖維發(fā)芽程度明顯低于RS+ND組（P＜0.05），NS+ND組和NS+KD組Timm’s顆粒分布無明顯差異（P＞0.05）；在齒狀回，RS+ND組苔蘚纖維發(fā)芽程度明顯高于NS+N

7、D組（P＜0.05），而RS+KD組與RS+ND組、NS+KD組與NS+ND組Timm’s顆粒分布無明顯差異（P＞0.05）。
　　 4、免疫印跡：
　　 (1)RS+ND組與NS+ND組相比，大腦皮質(zhì)及海馬ZnT-3的表達顯著增高(P＜0.05);RS+KD組與RS+ND組相比，ZnT-3的表達顯著降低（P＜0.05）；NS+KD組與NS+ND組相比，ZnT-3的表達顯著降低（P＜0.05）。
　　 (2)RS

8、+ND組與NS+ND組相比，大腦皮質(zhì)及海馬PRG-1的表達顯著增高（P＜0.05）；RS+KD組與RS+ND組相比，PRG-1的表達顯著降低（P＜0.05）；NS+KD組與NS+ND組相比，PRG-1的表達無顯著性差異（P＞0.05）。
　　 (3)RS+ND組與NS+ND紐相比，大腦皮質(zhì)及海馬中bcl-2的表達顯著降低（P＜0.05）；RS+KD組與RS+ND組相比，bcl-2的表達顯著增高(P＜0.05);NS+KD組與NS

9、+ND組相比，bcl-2的表達無顯著性差異（P＞0.05）。
　　 結論：
　　 1、三氟乙醚誘導新生期大鼠反復長程驚厥導致神經(jīng)行為的損傷。造成海馬苔蘚纖維異常發(fā)芽，同時使苔蘚纖維發(fā)芽相關分子ZnT-3、PRG-1表達升高，抗凋亡蛋白Bcl-2表達降低。
　　 2、驚厥后采用生酮飲食進行干預，能抑制大鼠體重增長。改善大鼠的神經(jīng)行為，能減輕驚厥后海馬苔蘚纖維異常發(fā)芽程度，同時明顯下調(diào)苔蘚纖維發(fā)芽相關分子ZnT-3、