生酮飲食對(duì)新生期反復(fù)驚厥大鼠干預(yù)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　 探討生酮飲食對(duì)三氟乙醚誘導(dǎo)新生大鼠反復(fù)驚厥的干預(yù)作用及分子機(jī)制。
　　 方法：
　　 日齡7天(P7)的Sprague-Dawley(SD)大鼠共40只，隨機(jī)分為對(duì)照組(NS組)和驚厥組(RS組)，每組各20只。適應(yīng)性喂養(yǎng)一天后，RS組大鼠吸入三氟乙醚誘導(dǎo)驚厥發(fā)作，反復(fù)誘導(dǎo)驚厥持續(xù)30min，每日一次，同樣方法連續(xù)誘導(dǎo)8天；NS組同樣操作但不吸入三氟乙醚。在P21依據(jù)是否給予生酮飲食(KD)干預(yù)，每

2、組大鼠再隨機(jī)分為兩組，即未驚厥普通飲食組(NS+ND)、未驚厥生酮飲食組(NS+KD)、驚厥普通飲食組(RS+ND)、驚厥生酮飲食組(RS+KD)，每組各10只。NS+ND組和RS+ND組大鼠給予普通飲食，NS+KD組和RS+KD組大鼠給予生酮飲食，飲食干預(yù)三周。在KD實(shí)行當(dāng)日、7日、21日每組大鼠尾靜脈采血對(duì)其血糖和血酮值進(jìn)行監(jiān)測(cè)。飲食干預(yù)期間每隔三天測(cè)量并記錄各組大鼠的體重。在P28、P35分別進(jìn)行兩次神經(jīng)行為測(cè)定包括攀金屬網(wǎng)實(shí)驗(yàn)、

3、握力實(shí)驗(yàn)、負(fù)向趨地反應(yīng)實(shí)驗(yàn)；P36行曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)。P43每組各隨機(jī)取6只大鼠共24只，斷頭取大腦皮質(zhì)及海馬，用免疫印跡法檢測(cè)各組大鼠大腦皮質(zhì)及海馬ZnT-3、PRG-1、bcl-2蛋白的表達(dá)。每組各取4只大鼠共16只采用Timm染色法觀測(cè)各組大鼠海馬區(qū)苔蘚纖維發(fā)芽情況。
　　 結(jié)果：
　　 1、對(duì)體重的影響：KD干預(yù)三天后，KD組(NS+KD組、RS+KD組)較相應(yīng)的ND組(NS+ND組、RS+ND組)體重顯著降低（P＜0.

4、05），這種狀態(tài)一直持續(xù)到實(shí)驗(yàn)結(jié)束。并且隨著大鼠年齡的增長(zhǎng)，ND組大鼠的體重較前逐步增長(zhǎng)，而KD組大鼠體重較前逐步的降低。
　　 2、神經(jīng)行為實(shí)驗(yàn)：
　　 (1)攀金屬網(wǎng)實(shí)驗(yàn)顯示：隨著日齡的增長(zhǎng)，各組大鼠較前攀金屬網(wǎng)所需時(shí)間均縮短。組間比較KD組較相應(yīng)的ND組攀金屬網(wǎng)所需時(shí)間顯著縮短(P＜0.05)。.RS組（RS+ND組與RS+KD組）較相應(yīng)的NS組(NS+ND組、NS+KD組)攀金屬網(wǎng)所需時(shí)間在P28顯著增加（P＜0

5、.05），而在P35無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。
　　 (2)握力實(shí)驗(yàn)顯示：隨著日齡的增長(zhǎng)，各組大鼠較前握力所維持的時(shí)間均縮短。KD組較較相應(yīng)的ND組握力維持時(shí)間延長(zhǎng)（P＜0.05），RS組較相應(yīng)的NS組握力維持時(shí)間縮短(P＜0.05)。
　　 (3)負(fù)向趨地反應(yīng)實(shí)驗(yàn)顯示：各組大鼠不同日齡負(fù)向趨地反應(yīng)時(shí)間無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。
　　 (4)曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)顯示：四組大鼠曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中延遲時(shí)間無(wú)顯著性差異（P＞0.0

6、5）；RS+KD組比RS+ND組開(kāi)場(chǎng)得分顯著降低（P＜0.05）；RS+ND組比NS+ND組修飾行為顯著增加(P＜0.05)。
　　 3、Neo-Timm染色：在CA3區(qū)，RS+ND組苔蘚纖維發(fā)芽程度明顯高于NS+ND組（P＜0.05），RS+KD組苔蘚纖維發(fā)芽程度明顯低于RS+ND組（P＜0.05），NS+ND組和NS+KD組Timm’s顆粒分布無(wú)明顯差異（P＞0.05）；在齒狀回，RS+ND組苔蘚纖維發(fā)芽程度明顯高于NS+N

7、D組（P＜0.05），而RS+KD組與RS+ND組、NS+KD組與NS+ND組Timm’s顆粒分布無(wú)明顯差異（P＞0.05）。
　　 4、免疫印跡：
　　 (1)RS+ND組與NS+ND組相比，大腦皮質(zhì)及海馬ZnT-3的表達(dá)顯著增高(P＜0.05);RS+KD組與RS+ND組相比，ZnT-3的表達(dá)顯著降低（P＜0.05）；NS+KD組與NS+ND組相比，ZnT-3的表達(dá)顯著降低（P＜0.05）。
　　 (2)RS

8、+ND組與NS+ND組相比，大腦皮質(zhì)及海馬PRG-1的表達(dá)顯著增高（P＜0.05）；RS+KD組與RS+ND組相比，PRG-1的表達(dá)顯著降低（P＜0.05）；NS+KD組與NS+ND組相比，PRG-1的表達(dá)無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。
　　 (3)RS+ND組與NS+ND紐相比，大腦皮質(zhì)及海馬中bcl-2的表達(dá)顯著降低（P＜0.05）；RS+KD組與RS+ND組相比，bcl-2的表達(dá)顯著增高(P＜0.05);NS+KD組與NS

9、+ND組相比，bcl-2的表達(dá)無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 1、三氟乙醚誘導(dǎo)新生期大鼠反復(fù)長(zhǎng)程驚厥導(dǎo)致神經(jīng)行為的損傷。造成海馬苔蘚纖維異常發(fā)芽，同時(shí)使苔蘚纖維發(fā)芽相關(guān)分子ZnT-3、PRG-1表達(dá)升高，抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)降低。
　　 2、驚厥后采用生酮飲食進(jìn)行干預(yù)，能抑制大鼠體重增長(zhǎng)。改善大鼠的神經(jīng)行為，能減輕驚厥后海馬苔蘚纖維異常發(fā)芽程度，同時(shí)明顯下調(diào)苔蘚纖維發(fā)芽相關(guān)分子ZnT-3、