花生再生體系的優(yōu)化及AhSAD基因啟動子的轉化.pdf

1、本研究選用花生品種遠雜9307、冀甜1號、羅漢果、花37、白沙1016的上胚軸為外植體，對愈傷組織誘導和再生體系進行研究，通過比較不同預培養(yǎng)時間、不同激素配比、不同基因型的誘導愈傷差異確立適宜花生上胚軸愈傷組織誘導的最佳培養(yǎng)基。分別從體細胞胚發(fā)生途徑和器官間接發(fā)生途徑探索花生上胚軸離體再生的最佳途徑。確立最適宜的培養(yǎng)條件進行19種不同花生品種篩選。在優(yōu)化的再生體系基礎上進行農桿菌介導的遺傳轉化。遺傳轉化方面，對農桿菌介導的遺傳轉化條件進

2、行優(yōu)化，分別從 Km篩選濃度，受體材料、侵染時間、共培養(yǎng)時間完善轉化流程，將花生Δ9-硬脂酰-ACP脫氫酶基因啟動子AhSAD轉化不同花生品種的受體材料，獲得陽性植株，主要研究結果如下：
　?。?）預培養(yǎng)時間不同，愈傷組織狀態(tài)存在明顯差異，預培養(yǎng)0d的上胚軸易形成胚性愈傷，預培養(yǎng)7d的上胚軸狀態(tài)優(yōu)于3d和10d。
　　（2）確定MSB5+Pic3mg/L為最適宜誘導培養(yǎng)基，胚性愈傷誘導率最高可達60％以上，該類培養(yǎng)基適宜本研

3、究中多數(shù)花生品種的愈傷誘導，并可進行多次繼代培養(yǎng)得到重復性體胚發(fā)生培養(yǎng)物。MSB5+Pic3mg/L+Gln1g/L(+)AgNO3（2mg/L）為最佳繼代培養(yǎng)基。
　?。?）愈傷組織進一步誘導體細胞胚發(fā)生的最佳培養(yǎng)基為 MS+0.4mg/L6-BA+0.1mg/LNAA，成苗率最高為46.77％。繼代過程先在6-BA0.4mg/L+NAA0.1mg/L再生，交替使用MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.5mg/L成苗狀況較好；

4、愈傷組織誘導不定芽的最佳培養(yǎng)基為 MS+TDZ0.2mg/L+6-BA3.0mg/L+NAA0.5mg/L，可誘導出不定芽且分化率最高為42％。
　?。?）不同基因型的花生品種在相同的培養(yǎng)基中出現(xiàn)誘導和再生差異，9048,9102出愈率在70％-80％之間,9020,9092,9110出愈率為60％-70％，9059出愈率最低僅為16％。9099,9097再生率在40％-50％之間，9036,9093次之。
　?。?）最終確