B7-H3對(duì)肺炎鏈球菌腦膜炎小鼠金屬基質(zhì)蛋白酶-9蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、目的：細(xì)菌性腦膜炎是兒童期最常見的神經(jīng)系統(tǒng)感染性疾病之一，其確切免疫病理機(jī)制尚待進(jìn)一步確定。金屬基質(zhì)蛋白酶-9(matrix metalloproteinases-9，MMP-9)在血腦屏障的損害過程中發(fā)揮了重要作用。B7同源性3(B7homology3，B7-H3)，作為協(xié)同刺激分子家族的一個(gè)新成員，在免疫應(yīng)答中發(fā)揮著重要的調(diào)控作用。本研究通過體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)，系統(tǒng)分析B7-H3對(duì)肺炎鏈球菌腦膜炎MMP-9蛋白的表達(dá)和病情進(jìn)展的作用，以期為

2、細(xì)菌性腦膜炎的免疫干預(yù)提供新的思路和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：
　　 方法一（體內(nèi)實(shí)驗(yàn)），研究B7-H3對(duì)肺炎鏈球菌腦膜炎小鼠神經(jīng)行為改變、體質(zhì)量變化和腦組織MMP-9蛋白表達(dá)的影響。取月齡1.5-2月的健康雄性BALB/c小鼠36只，隨機(jī)分為3組：生理鹽水對(duì)照組（CON組），肺炎鏈球菌組（Streptococcus pneumonia，SP組），肺炎鏈球菌+B7-H3(SP+B7-H3組)，每組各12只。麻醉后，通過側(cè)腦

3、室途徑注入肺炎鏈球菌懸液SμL+生理鹽水1OμL，制備肺炎鏈球菌腦膜炎模型：SP+B7-H3組注入肺炎鏈球菌懸液5μL和B7-H3蛋白10μL，CON組僅注入生理鹽水15μL。三組小鼠均在術(shù)后6h、24h進(jìn)行1）體質(zhì)量變化觀測(cè)；2）神經(jīng)行為評(píng)估；3）HE染色方法觀察腦組織炎癥狀況；4）免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)腦組織中MMP-9蛋白的表達(dá)。
　　 方法二（體外實(shí)驗(yàn)），研究B7-H3對(duì)肺炎鏈球菌感染條件下小膠質(zhì)細(xì)胞上清液MMP-9蛋白表

4、達(dá)的影響。生后1-3天內(nèi)的新生BALB/C小鼠，取其腦組織，經(jīng)過分離、培養(yǎng)、純化獲得原代小膠質(zhì)細(xì)胞，接種于24孔培養(yǎng)板，細(xì)胞密度：1X105/孔。實(shí)驗(yàn)分組：正常對(duì)照組（CON組）、肺炎鏈球菌感染組(SP組)、肺炎鏈球菌+B7-H3組(SP+B7-H3組)，三組細(xì)胞中均加入等量的頭孢曲松（濃度為lOOμg.mL-1）抑制細(xì)菌過度繁殖。分別在5h、24h、48h收集上清液，用ELISA方法檢測(cè)上清液中MMP-9蛋白的表達(dá)。每次實(shí)驗(yàn)，每組每個(gè)

5、時(shí)間點(diǎn)設(shè)3個(gè)復(fù)孔，并重復(fù)兩次獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)。
　　 結(jié)果：
　　 結(jié)果一（體內(nèi)實(shí)驗(yàn)），
　　 1、神經(jīng)行為評(píng)分：SP組在6h、24h時(shí)神經(jīng)行為評(píng)分均較CON組明顯降低(P＜0.01);SP+B7-H3組在6h、24h時(shí)神經(jīng)行為評(píng)分明顯低于SP組(P＜0.05)。
　　 2、體質(zhì)量變化：SP組在6h、24h時(shí)體質(zhì)量下降均較CON組明顯(P值分別為P＜0.01、P＜0.05);SP+B7-H3組在6h、24h時(shí)體

6、質(zhì)量均較SP組明顯降低(P＜0.05)。
　　 3、腦組織HE染色：6h時(shí)，相對(duì)于組，SP組小鼠軟腦膜血管充血明顯，蛛網(wǎng)膜下腔顯著擴(kuò)張，腦膜及蛛網(wǎng)膜下腔有少許炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；24h時(shí)，相對(duì)于SP組，SP+B7-H3組小鼠軟腦膜血管充血顯著，蛛網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)完整性受損，蛛網(wǎng)膜下腔開放，腦膜及蛛網(wǎng)膜下腔炎性細(xì)胞浸潤(rùn)加劇。
　　 4、腦組織免疫組化分析：CON組于6h、24h時(shí)均有少量MMP-9蛋白表達(dá)；SP組在6h、24h時(shí)與CON

7、組比較MMP-9蛋白的表達(dá)均顯著增高(P＜0.01);SP+B7-H3組在6h、24h時(shí)與SP組比較MMP-9蛋白的表達(dá)均明顯增高(P＜0.05)。
　　 結(jié)果二（體外實(shí)驗(yàn)），SP組在5h、24h、48h時(shí)MMP-9蛋白的表達(dá)均明顯高于CON組(P＜0.05);SP+B7-H3組在5h、24h、48h時(shí)與SP組比較，MMP-9蛋白的表達(dá)均顯著增高（P值分別為P＜0.01、P＜0.05、P＜0.05）。
　　 結(jié)論：