第一部分 實(shí)時定量PCR法檢測骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植到梗死心肌后的存活;第二部分 心肌梗死后移植骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞后全身細(xì)胞分布的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分：實(shí)時定量PCR法檢測骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植到梗死心肌后的存活 目的： 建立一種干細(xì)胞移植到梗死心肌后檢測其存活數(shù)量的有效方法。 方法： 選取10只雌性SD大鼠結(jié)扎前降支，心肌梗死3周后，隨機(jī)分成移植組及對照組，同時選取雄性大鼠培養(yǎng)出骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)，分別將MSCs(3×106個，50μL)及等體積的PBS液移植到梗死心肌中，24h后通過實(shí)時定量PCR(Real-time PCR)檢測雄

2、性大鼠Y染色體上特有的基因SRY，從而得知移植MSCs的存活數(shù)量。 結(jié)果： MSCs移植24h后，移植組梗死心肌中檢測到SRY基因數(shù)占移植總數(shù)的14.9％±8.3％，存活細(xì)胞的絕對數(shù)量為447195±248090，而對照組均未檢測到SRY基因的存在。 結(jié)論： 用Real-time PCR的方法能有效地檢測到具有SRY基因的干細(xì)胞，從而能準(zhǔn)確地得知移植干細(xì)胞的存活數(shù)量，Real-time PCR技術(shù)在心梗后

3、干細(xì)胞移植的基礎(chǔ)研究及臨床應(yīng)用中具有重要的價值。 第二部分：心肌梗死后移植骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞后全身細(xì)胞分布的實(shí)驗(yàn)研究 目的： 觀察經(jīng)心肌梗死邊緣區(qū)移植骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)24小時和2周后的全身分布情況。 方法： 雄性SD大鼠的MSCs用溴脫氧尿苷(BrdU)標(biāo)記。雌性SD大鼠經(jīng)心梗3周后隨機(jī)分為2組。第1組為標(biāo)記細(xì)胞(3×106，50μL)經(jīng)心肌注入心梗邊緣區(qū)(n=20)。第2組為等體積的磷

4、酸鹽緩沖鹽水(PBS)經(jīng)心肌注入心梗邊緣區(qū)(n=20)。移植細(xì)胞24小時及2周后，體內(nèi)細(xì)胞的分布情況通過實(shí)時定量PCR法(RT-PCR)檢測及病理切片免疫組化染色來評價。 結(jié)果： 細(xì)胞經(jīng)心梗邊緣區(qū)移植后可以分布在心臟以及心外臟器脾臟、肺臟和肝臟中。移植24小時后細(xì)胞主要在心臟中分布(467467±191387)，其它臟器中的分布較少，而在2周后移植細(xì)胞在包括心臟(112388±43751)在內(nèi)的各個臟器中的分布都很少，病