第一部分：不同心臟狀態(tài)下心梗邊緣區(qū)注射骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的比較;第二部分：體外循環(huán)和停跳的心臟狀態(tài)對于經(jīng)冠狀動脈內(nèi)移植骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的影響.pdf

1、目的：主要研究停跳與不停跳兩種心臟狀態(tài)下，經(jīng)豬心梗模型心肌注射骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞后全身細(xì)胞的分布情況。 方法：實驗方法分為體內(nèi)和體外實驗兩部分體外實驗部分：從雄性中華小型豬髂骨處抽取骨髓，體外培養(yǎng)擴(kuò)增骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞并進(jìn)行鑒定。將超順磁氧化鐵顆粒和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞共同孵育培養(yǎng)36-48小時。使用普魯士藍(lán)染色評價標(biāo)記后的細(xì)胞鐵離子標(biāo)記的效率；使用臺盼藍(lán)染色檢驗標(biāo)記后細(xì)胞的活性。體內(nèi)實驗部分：用帶球囊血管造影導(dǎo)管經(jīng)股動脈導(dǎo)入雌性豬左冠

2、狀動脈前降支，在第二對角支的近端將球囊擴(kuò)張90分鐘造成急性心梗模型。模型建立后7天隨機(jī)分為四組。第1組為停跳心臟細(xì)胞注射組(n=6)，體外循環(huán)后心臟停跳，標(biāo)記的細(xì)胞(1×108)經(jīng)心肌注入心梗周邊區(qū)。第2組為不停跳心臟細(xì)胞注射組(n=6)，相同的細(xì)胞在跳動下心臟經(jīng)心肌注入心梗周邊區(qū)。第3組停跳心臟對照組(n=6)和第4組不停跳心臟對照組(n=6)中，相同劑量的生理鹽水分別在停跳和不停跳心臟狀態(tài)下經(jīng)心肌注入心梗周邊區(qū)。3天后，體內(nèi)細(xì)胞分布

3、通過核磁共振的T2*變化及雄性細(xì)胞特異性的SRY基因的實時定量PCR檢測來評價。并取動物心，肝，脾，肺，腎的標(biāo)本，切片后進(jìn)行普魯士藍(lán)染色，觀察細(xì)胞在體內(nèi)的分布和形態(tài)。 結(jié)果：體外實驗部分：普魯士蘭染色的超順磁鐵納米顆粒標(biāo)記的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞顯示，藍(lán)染的鐵的小囊泡或小顆粒分布于幾乎每個細(xì)胞的胞漿中，其標(biāo)記效率幾乎達(dá)到100％。并且，在臺盼蘭排斥實驗中，95％以上的細(xì)胞拒染臺盼蘭，可見骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)鐵標(biāo)記后有良好的活性。體內(nèi)實驗

4、部分：細(xì)胞可以在心，脾，肺和肝中檢測到。1，2組中大部分的注射細(xì)胞滯留在心臟，并且1組中心臟細(xì)胞的滯留較2組多(T2* 改變：22.3±2.2 versus 17.00±0.84：SRY gene:0.150±0.062 versus 0.072±0.003)。病理學(xué)檢查可以見移植細(xì)胞呈普魯士藍(lán)染色陽性，并與磁共振影像學(xué)的顯影有很好的一致性。 結(jié)論：經(jīng)心肌注射骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞后，許多細(xì)胞流向心臟以外的器官，尤其是脾臟。在心臟停跳