Omi-HtrA2基因及蛋白在人涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞株中的表達(dá)及作用的研究.pdf

1、目的:本研究旨在探討Omi/HtrA2基因及蛋白水平在人涎腺腺樣囊性癌不同細(xì)胞株中的表達(dá)變化，及其對(duì)人腺樣囊性癌細(xì)胞凋亡的影響。
　　 方法:選取人涎腺腺樣囊性癌高肺轉(zhuǎn)移潛能和低肺轉(zhuǎn)移潛能的細(xì)胞株。1、細(xì)胞傳代，利用倒置顯微鏡觀察不同細(xì)胞株的形態(tài)學(xué)差異，利用免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)傳代細(xì)胞株中CEA、EMA在腫瘤細(xì)胞的表達(dá)，證實(shí)傳代的成功;2、采用CMIAS真彩色病理圖像分析系統(tǒng)對(duì)兩種不同細(xì)胞株的細(xì)胞核、細(xì)胞漿的面積、核漿比例、細(xì)胞周長(zhǎng)

2、、平均直徑、圓度、形狀因子等形態(tài)學(xué)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)，統(tǒng)計(jì)分析，獲得脫落細(xì)胞形態(tài)學(xué)原始數(shù)據(jù)，進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)學(xué)的對(duì)比研究。3、采用流式細(xì)胞術(shù)方法檢測(cè)培養(yǎng)12h、24h、36h、48h、60h、72h時(shí)間節(jié)點(diǎn)Omi/HtrA2蛋白在兩種細(xì)胞株中的表達(dá)情況以及細(xì)胞周期分布差異。4、采用逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測(cè)Omi/HtrA2mRNA在兩種腺樣囊性癌細(xì)胞株中傳代培養(yǎng)12h、24h、36h、48h、60h、72h時(shí)間節(jié)點(diǎn)的表達(dá)差異。<

3、br>　　 結(jié)果:
　　 1.傳代培養(yǎng)后經(jīng)免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)CEA、EMA的表達(dá)情況，結(jié)果在高肺轉(zhuǎn)移細(xì)胞株中的陽(yáng)性細(xì)胞比率為84.33％±6.77％和82.88％±5.26％，在低肺轉(zhuǎn)移細(xì)胞株中的陽(yáng)性細(xì)胞比率分別為88.84％±7.27％和80.84％±6.16％，兩種指標(biāo)在不同細(xì)胞株中的陽(yáng)性率比較差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。同時(shí)證明兩種細(xì)胞株的傳代培養(yǎng)成功。
　　 2.高肺轉(zhuǎn)移細(xì)胞株呈梭形排列，粘附性較差，隨傳代

4、時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞異型性更加明顯、且梭形變較突出;低肺轉(zhuǎn)移細(xì)胞株呈圓形或卵圓形，細(xì)胞粘附性較前者略好，體積較小，細(xì)胞異型性不明顯;通過(guò)細(xì)胞形態(tài)學(xué)圖像分析系統(tǒng)對(duì)兩組細(xì)胞株進(jìn)行形態(tài)學(xué)分析，結(jié)果顯示兩種細(xì)胞株在細(xì)胞面積、周長(zhǎng)、等效直徑、長(zhǎng)徑、短徑間存在明顯差異，高肺轉(zhuǎn)移組明顯高于低肺轉(zhuǎn)移組，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05);兩組細(xì)胞株的細(xì)胞變異參數(shù)面積、周長(zhǎng)、等效直徑、長(zhǎng)徑、短徑間存在明顯差異，高肺轉(zhuǎn)移組明顯低于低肺轉(zhuǎn)移組組(P＜0.05)。<

5、br>　　 3.高肺轉(zhuǎn)移細(xì)胞株的細(xì)胞凋亡指數(shù)為12.8％±0.9％，低肺轉(zhuǎn)移組細(xì)胞凋亡指數(shù)為35.6％±4.3％，后者高于前者，兩組差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）。高肺轉(zhuǎn)移細(xì)胞株G1、G2、S期的細(xì)胞比值分別為56.44％±4.78％、6.4％±1.66％和37.22％±5.37％;低肺轉(zhuǎn)移細(xì)胞株的細(xì)胞比值分別為78.4％±5.96％，4.2％±0.45％和17.4％±4.25％;統(tǒng)計(jì)分析顯示:高肺轉(zhuǎn)移細(xì)胞株G1期比率明顯低于低肺轉(zhuǎn)

6、移細(xì)胞株(P＜0.05);G2期比率在兩組細(xì)胞株間無(wú)明顯差異(P＞0.05);S期比率在高肺轉(zhuǎn)移細(xì)胞株明顯高于低肺轉(zhuǎn)移細(xì)胞株（P＜0.05）。高肺轉(zhuǎn)移細(xì)胞株Omi/HtrA2蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率為18.4％±4.25％，低肺轉(zhuǎn)移組為45.6％±8.17％，高肺轉(zhuǎn)移細(xì)胞株明顯低于低肺轉(zhuǎn)移細(xì)胞株，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 4.RT-PCR擴(kuò)增結(jié)果顯示:Omi/HtrA2mRNA在高肺轉(zhuǎn)移性人涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞株中六個(gè)不同

7、培養(yǎng)時(shí)間節(jié)點(diǎn)均存在低表達(dá)，而在低肺轉(zhuǎn)移組細(xì)胞株中呈高表達(dá)，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論:
　　 1.不同轉(zhuǎn)移潛能的人涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞株在形態(tài)學(xué)參數(shù)方面存在一定的差異，這可能是造成其具有不同轉(zhuǎn)移潛能的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ);
　　 2.高肺轉(zhuǎn)移細(xì)胞株的凋亡指數(shù)和細(xì)胞周期分布與低肺轉(zhuǎn)移細(xì)胞株存在明顯差異，同時(shí)兩組細(xì)胞株的Omi/HtrA2 mRNA及蛋白的表達(dá)存在明顯的差別，后者可能是導(dǎo)致細(xì)胞凋亡以及肺轉(zhuǎn)移潛能差異的關(guān)鍵因子。