Omi-HtrA2信號通路介導(dǎo)高氧誘導(dǎo)肺泡上皮細(xì)胞凋亡的作用及機制.pdf

1、目的:研究Omi／HtrA2在高氧誘導(dǎo)肺泡上皮細(xì)胞凋亡中的作用及其細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制。
　　 方法:(1)以人肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞來源的肺腺癌細(xì)胞A549細(xì)胞為研究對象。(2)以高體積分?jǐn)?shù)氧(高氧)暴露作為攻擊因素。(3)先將實驗分為空氣組和高氧組,空氣組置于50ml／L CO2培養(yǎng)箱中,高氧組換液后,通入3L／min的900ml／L氧氣和50ml／L二氧化碳高純混合氣后置于50 ml／L CO2培養(yǎng)箱中,兩組分別于空氣或高氧暴露1

2、2,24,48h后收集細(xì)胞,探討Omi／HtrA2是否與高氧誘導(dǎo)肺泡上皮細(xì)胞凋亡有關(guān)。再將實驗分為空氣組、高氧組和Ucf-101干預(yù)組,探討Omi／HtrA2參與高氧誘導(dǎo)肺泡上皮細(xì)胞凋亡的細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制。(4)檢測指標(biāo):倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變,免疫組織化學(xué)法觀察Omi／HtrA2和caspase-3以及X連鎖凋亡抑制蛋白(Ⅹ-Lineked Inhibitor Apoptosis Proteins,XIAP)的表達(dá),流

3、式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率。(5)統(tǒng)計學(xué)處理:所有數(shù)值以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±S)表示,分別進(jìn)行配對t檢驗和單因素方差分析組間LSD檢驗,采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件完成。P<0.05為差異有顯著性。
　　 結(jié)果:(1)倒置相差顯微鏡下觀察人肺腺癌細(xì)胞A549細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化:空氣組細(xì)胞貼壁良好,無懸浮細(xì)胞,細(xì)胞透明度大,折光性強,呈鋪路石樣,為扁平的多角形,分裂相多,細(xì)胞排列緊密,連接成片,數(shù)量多,生長良好。高氧組細(xì)胞通高氧后隨時間

4、的延長,懸浮細(xì)胞逐漸增多,貼壁細(xì)胞生長緩慢,細(xì)胞數(shù)量比空氣組明顯減少,細(xì)胞胞體變暗,形態(tài)發(fā)生改變,由典型的扁平多角形細(xì)胞變?yōu)椴灰?guī)則圓形或橢圓形,折光性減弱,輪廓增強,胞質(zhì)中出現(xiàn)空泡,脂滴,顆粒樣物質(zhì),細(xì)胞間空隙加大,連接松散,細(xì)胞間可見較多細(xì)胞碎片。Ucf-101干預(yù)組:細(xì)胞損傷狀況明顯得到改善,較高氧組細(xì)胞生長狀況明顯好轉(zhuǎn),形態(tài)明顯變好,但未恢復(fù)至空氣組水平。(2)與空氣組(15.34±0.48)相比,高氧組細(xì)胞Omi／HtrA2表達(dá)

5、[12h(23.62±1.47),24h(34.32±1.97),48h(44.75±1.51)]均顯著升高,且高氧組隨高氧暴露時間的延長,Omi／HtrA2表達(dá)相應(yīng)增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.01)。(3)與空氣組細(xì)胞caspase-3表達(dá)(6.21±0.61)相比,高氧組12h,24h,48h細(xì)胞caspase分別為(14.90±0.78),(32.53±2.38),(61.42±2.74)均明顯升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.

6、01)。(4)與空氣組細(xì)胞(38.25±6.67)相比,高氧組48h細(xì)胞XIAP(4.53±1.16)明顯降低；與空氣組和高氧組相比,Ucf-101干預(yù)組細(xì)胞XIAP(11.01±2.03),差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.01)。(5)與空氣組細(xì)胞凋亡率(0.45±0.08)相比,高氧組細(xì)胞凋亡率(5.24±0.93)明顯升高；與空氣組和高氧組比較,Ucf-101干預(yù)組細(xì)胞凋亡率(1.70±0.66),差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.01)。