XIAP基因及蛋白在腺樣囊性癌細(xì)胞株中的表達(dá)及作用的研究.pdf

1、目的:本研究旨在探討XIAP基因及蛋白水平在腺樣囊性癌不同細(xì)胞株中的表達(dá)變化，及其對(duì)人腺樣囊性癌細(xì)胞凋亡的影響。
　　方法:
　　1細(xì)胞傳代和鑒定
　　選取人腺樣囊性癌肺高轉(zhuǎn)移潛能和低轉(zhuǎn)移潛能的細(xì)胞株，細(xì)胞復(fù)蘇后傳代培養(yǎng)，利用倒置顯微鏡觀察不同細(xì)胞株的形態(tài)學(xué)差異，利用免疫組化染色(EMA CEA)鑒定細(xì)胞株;
　　2細(xì)胞周期分析、凋亡指數(shù)分析和XIAP蛋白表達(dá)檢測(cè)采用流式細(xì)胞術(shù)方法檢測(cè)培養(yǎng)12h、24h、36h、

2、48h、60h、72h時(shí)間節(jié)點(diǎn)的細(xì)胞凋亡指數(shù)、細(xì)胞周期分布曲線，同時(shí)檢測(cè)XIAP蛋白在兩種細(xì)胞株中的表達(dá)情況。
　　3采用逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測(cè)XIAPmRNA在兩種腺樣囊性癌細(xì)胞株中傳代培養(yǎng)12h、24h、36h、48h、60h、72h時(shí)間節(jié)點(diǎn)的表達(dá)差異，利用激光掃描后經(jīng)Quantity ONE(BIO-RAD)軟件對(duì)目的基因進(jìn)行光密度相對(duì)定量分析比較。
　　結(jié)果:
　　1不同肺轉(zhuǎn)移細(xì)胞株中均存在

3、CEA、EMA的共同表達(dá)，同時(shí)證明兩種細(xì)胞株的傳代培養(yǎng)成功;高肺轉(zhuǎn)移細(xì)胞株中兩者的陽(yáng)性細(xì)胞比率為84.33％±6.77％和82.88％±5.26％，在低肺轉(zhuǎn)移細(xì)胞株中的陽(yáng)性細(xì)胞比率分別為88.84％±7.27％和80.84％±6.16％，兩種指標(biāo)在不同細(xì)胞株中的陽(yáng)性率比較差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);高肺轉(zhuǎn)移細(xì)胞株呈梭形排列，粘附性較差，隨傳代時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞異型性更加明顯、且梭形變較突出;低轉(zhuǎn)移細(xì)胞株呈圓形或卵圓形，細(xì)胞粘附性強(qiáng)，

4、體積較小，呈片狀分布，細(xì)胞異型性不明顯。
　　2高肺轉(zhuǎn)移細(xì)胞株的細(xì)胞凋亡指數(shù)在12-72h呈穩(wěn)定的低水平，平均11.4％±0.5％，6個(gè)時(shí)間節(jié)點(diǎn)的凋亡指數(shù)經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析無(wú)明顯差別(P＞0.05);低轉(zhuǎn)移組細(xì)胞凋亡指數(shù)在6個(gè)時(shí)間節(jié)點(diǎn)呈明顯的高水平，平均為36.5％±5.2％，且各個(gè)節(jié)點(diǎn)比較無(wú)明顯差別（P＞0.05）;低轉(zhuǎn)移組細(xì)胞凋亡指數(shù)高于高肺轉(zhuǎn)移組，兩組差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);高肺轉(zhuǎn)移細(xì)胞株G1、G2、S期的細(xì)胞比值分別為

5、54.25％±4.45％、6.4％±1.35％和39.22％±4.55％;低轉(zhuǎn)移細(xì)胞株的細(xì)胞比值分別為76.4％±8.45％，4.1％±0.24％和19.8％±6.23％;統(tǒng)計(jì)分析顯示:高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株G1期比率明顯低于低轉(zhuǎn)移細(xì)胞株(P＜0.05); G2期比率在兩組細(xì)胞株間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);S期比率在高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株明顯高于低轉(zhuǎn)移細(xì)胞株(P＜0.05)。高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株XIAP蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率為48.4％±5.34％，低轉(zhuǎn)移組為2

6、4.6％±4.12％，高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株明顯高于低轉(zhuǎn)移細(xì)胞株，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。(3)RT-PCR擴(kuò)增結(jié)果顯示:XIAPmRNA在兩種細(xì)胞株中的不同時(shí)間節(jié)點(diǎn)均存在表達(dá)，且高轉(zhuǎn)移性腺樣囊性癌細(xì)胞株中六個(gè)不同培養(yǎng)時(shí)間節(jié)點(diǎn)均存在高表達(dá)，表達(dá)水平無(wú)明顯差別（P＞0.05）;而在低轉(zhuǎn)移組細(xì)胞株中呈一致的低水平表達(dá)，6個(gè)時(shí)間節(jié)點(diǎn)表達(dá)水平差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）;兩種細(xì)胞株的mRNA表達(dá)水平間比較差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

7、
　　結(jié)論:
　　1不同轉(zhuǎn)移潛能的腺樣囊性癌細(xì)胞株在形態(tài)學(xué)方面存在一定的差異，高肺轉(zhuǎn)移細(xì)胞株粘附性差，且梭形變明顯，這可能是造成其具有不同轉(zhuǎn)移潛能的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ);
　　2高肺轉(zhuǎn)移細(xì)胞株的凋亡指數(shù)高表達(dá)XIAP蛋白，且其凋亡明顯受到抑制，細(xì)胞周期S期比例明顯升高;低肺轉(zhuǎn)移細(xì)胞株凋亡無(wú)明顯影響;細(xì)胞周期的G期占明顯優(yōu)勢(shì)。
　　3兩組細(xì)胞株都存在XIAPmRNA基因的表達(dá)，在12-72h之間高肺轉(zhuǎn)移細(xì)胞株高水平表達(dá)，低肺轉(zhuǎn)