小劑量阿糖胞苷聯(lián)合干擾素誘導(dǎo)慢性髓細(xì)胞白血病細(xì)胞分化為樹突狀細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：自20世紀(jì)80年代起α-干擾素(interferon-α，IFN-α)治療慢性髓細(xì)胞白血病(chrorlic myeloid leukemia，CML)以來，其臨床療效已被公認(rèn)。并且IFN-α治療CML達(dá)到細(xì)胞遺傳學(xué)緩解的患者較之IFN-α治療無效者其生存期明顯延長(zhǎng)。臨床觀察表明小劑量阿糖胞苷(low dose cytosine arabil30Side，LD-Ara-C)聯(lián)合IFN-α治療CML患者較單用干擾素療效更佳，且具有較

2、高的細(xì)胞遺傳學(xué)緩解率。IFN-α治療CML有效的機(jī)制之一是與其增強(qiáng)樹突狀細(xì)胞(dendritic cells，Des)的表型及功能有關(guān)。DC是體內(nèi)唯一能激活初始型T細(xì)胞的抗原遞呈細(xì)胞，在機(jī)體免疫系統(tǒng)中處于中心地位。而LD-Ara-C對(duì)急性白血病細(xì)胞有誘導(dǎo)分化的作用，那么，LD-Ara-C聯(lián)合IFN-α治療CML的有效性優(yōu)于單用IFN-α是否與誘導(dǎo)CML細(xì)胞分化為更成熟DC，從而增強(qiáng)DC功能有關(guān)?目前尚無相關(guān)報(bào)道。為此，本實(shí)驗(yàn)擬采用LD-

3、Ara-C聯(lián)合IFN-α誘導(dǎo)CML骨髓單個(gè)核細(xì)胞分化為DC，探討其治療CML有效的可能機(jī)制，為臨床治療提供理論依據(jù)。 方法：Ficoll密度梯度離心法分離初診未治CML患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞(bone ma=rrow monomlclear cell，BMMNC)，將所得細(xì)胞分別加入不同劑量Ara-C(5ng/ml、10ng/l、25ng/ml、50ng/ml)并以不加Ara-C為對(duì)照組，同時(shí)加入GM-CSF、IL-4誘導(dǎo)培養(yǎng)7天；

4、倒置顯微鏡及光鏡觀察細(xì)胞形態(tài)；流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面特異性標(biāo)志(CD1a，CD83，CD86，HLA-DR，CD54)；MTT法測(cè)其混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)能力。 結(jié)果：CML-MNC在培養(yǎng)7d后，細(xì)胞聚集成簇，體積明顯增大，胞槳豐富，具有樹突狀突起的細(xì)胞多且突起明顯；瑞氏-吉姆薩染色光鏡下可見細(xì)胞膜有明顯的刺樣突起，核偏在且不規(guī)則，部分含有偏心的雙核，顯示典型樹突狀細(xì)胞形態(tài)。流式細(xì)胞儀檢測(cè)表明：DC特征性表面分子(CDla，CD83，

5、CD86，HLA-DR，CD54)的表達(dá)，實(shí)驗(yàn)組A和實(shí)驗(yàn)組B明顯高于單用對(duì)照組組，差異有顯著性(P<0.05)； 其中實(shí)驗(yàn)組A高于實(shí)驗(yàn)組B(P<0.05)，實(shí)驗(yàn)組C則大部分細(xì)胞死亡，實(shí)驗(yàn)組D全部細(xì)胞死亡。MLR能力由強(qiáng)到弱分別為：實(shí)驗(yàn)組B>實(shí)驗(yàn)組A>對(duì)照組>實(shí)驗(yàn)組C>實(shí)驗(yàn)組D，差異均有顯著性(P<0.05)。 結(jié)論：IFN-α聯(lián)合LD-Ara-C及細(xì)胞因子可以促使CML骨髓源性細(xì)胞誘導(dǎo)分化為具有形態(tài)和免疫表型特征的DC，