核基質蛋白在姜黃素誘導人永生化表皮HaCaT細胞凋亡過程中的變化研究.pdf

1、本文在鑒定姜黃素(curcumin，Cur)誘導人永生化表皮HaCaT細胞凋亡的基礎上，應用選擇性抽提整裝透射電鏡和蛋白質組學分析技術，對HaCaT細胞誘導凋亡過程中核基質—中間纖維系統(tǒng)的構型變化和核基質蛋白組成的變化進行系統(tǒng)研究。分析鑒定與表皮細胞凋亡相關的特異核基質蛋白，并探索它們在表皮細胞凋亡過程中的調控作用，以期能夠在較為整體的水平上進一步認識表皮細胞凋亡及其機理，從而找出表皮細胞凋亡研究的新方向。 實驗結果顯示，經7.

2、5μg/mL姜黃素處理之后，人永生化表皮HaCaT細胞的增殖受到明顯抑制，細胞生長抑制率達83.03％；細胞周期檢測出現亞二倍體(亞G1期)細胞峰值，細胞凋亡率達13.1％，并發(fā)生G2/M期阻滯；瓊脂糖凝膠電泳出現細胞凋亡典型的DNA“梯狀”條帶；光鏡和透射電鏡觀察結果顯示，經姜黃素誘導處理后的HaCaT細胞出現了細胞體積縮小、核質比例減小、細胞核固縮、核內染色質凝聚、線粒體腫脹、內質網網腔擴大、出現凋亡小體等顯著的凋亡特征；而且與細胞

3、凋亡相關的癌基因bcl-2表達下調，抑癌基因p53、fas、bax等表達上調。選擇性抽提整裝光鏡和電鏡觀察顯示，經姜黃素處理的HaCaT細胞的核基質和中間纖維比對照組明顯稀疏，且分布更加不均勻，并分別與核纖層連系，形成趨于斷裂但相對還較為完整的網狀結構；雙向凝膠電泳分析顯示在姜黃素誘導HaCaT細胞凋亡前后存在27個差異表達的核基質蛋白，經質譜分析，鑒定了其中的21個蛋白，其中在凋亡的HaCaT細胞中表達上調的9種蛋白鑒定為：Chape

4、ronin containing TCP1、RNA binding motif、Hypothetical proteinAt4g18230、serine proteinase inhibitor、SUMO-1-specific protease、nucleoporinNUP107、coagulation factorⅤ precursor、Apoptosis-inducing factor、Caspase3；表達下調的6種蛋白質為LMN

5、A protein、Vimentin、Glyeosyl transferase，family2、Actin、MAP/microtubule affinity-regulating kinase、translation initiation factor IF-2。誘導凋亡處理后新出現的6種蛋白質為Alcohol dehydrogenase[NADV+]、鋅指蛋白ZNF483、MHC classⅠ antigen、M-phase phos

6、phoprotein-1、Heat shock90kDaprotein、Protein kinase D3。鑒定出的21種核基質蛋白中除vimentin、actin，LMNAprotein，NUP107，HSP90，SUMO-4蛋白酶，ZNF483 protein，MHC classⅠ antigen，Chaperonin containing TCP1外，其余均為首次在核基質中發(fā)現的蛋白質。 研究結果表明，7.5μg/mL姜黃