維甲酸誘導人成骨肉瘤MG-63細胞分化過程中核基質(zhì)構型及其蛋白組成變化研究.pdf

1、本文在鑒定維甲酸(retinoicacid，RA)誘導人成骨肉瘤MG-63細胞終末分化的基礎上，應用選擇性抽提、整裝透射電鏡和蛋白質(zhì)組學分析技術，對MG-63細胞誘導分化過程中核基質(zhì)-中間纖維系統(tǒng)的構型變化和核基質(zhì)蛋白組成的變化進行系統(tǒng)研究。分析鑒定與腫瘤增殖分化相關的特異核基質(zhì)蛋白，并探索它們在腫瘤細胞誘導分化過程中的調(diào)控作用，以期能夠在較為整體的水平上進一步認識細胞癌變與逆轉機理，從而找出細胞增殖與分化調(diào)控研究的新方向。 實

2、驗結果顯示，經(jīng)1μmol/LRA處理之后，人成骨肉瘤MG-63細胞的增殖受到了明顯抑制，發(fā)生了G0/G1期阻滯，細胞形態(tài)改變的同時伴隨著癌基因c-myc、c-fos的表達下調(diào)和抑癌基因Rb、p27的上調(diào)表達。并且RA能夠促進MG-63細胞Ⅰ型膠原、骨鈣蛋白、骨粘素和骨結節(jié)等骨特異性標志物的表達和形成。選擇性抽提整裝透射電鏡觀察顯示經(jīng)RA處理后MG-63細胞的核基質(zhì)-中間纖維系統(tǒng)構型發(fā)生了恢復性變化，由腫瘤細胞核基質(zhì)不規(guī)則聚積的纖維結構轉

3、變?yōu)閷哟畏置?、精細發(fā)達的網(wǎng)狀結構。雙向凝膠電泳分析顯示在RA誘導MG-63細胞分化前后存在43個差異表達的核基質(zhì)蛋白，經(jīng)質(zhì)譜分析，鑒定了其中的25個蛋白。其中在分化的MG-63細胞中表達下調(diào)的蛋白鑒定為熱休克蛋白HSP70，Cyclin折疊蛋白1，actin，14號染色體ORF10編碼的蛋白，轉錄延伸因子A，nucleophosmin蛋白，hnRNPA2/B1和prohibitin;表達上調(diào)和新出現(xiàn)的蛋白質(zhì)為鋅指蛋白ZNF710，ZYG

4、11B蛋白，孤兒核受體NR1D2，RAS家族RAB3D蛋白，Rb結合蛋白RBBP7，vimentin，泛素化水解酶UCHinteractingprotein，MHCⅠ類抗原，類CDK蛋白3，免疫球蛋白超家族成員DORA蛋白和泛素相關蛋白sentrin家族成員SUMO-4。其中除vimentin，actin，HSP70，nucleophosmin和RBBP7外，均屬首次在核基質(zhì)中發(fā)現(xiàn)。 研究結果表明，1μmol/LRA對人成骨肉瘤