核基質蛋白在人成骨肉瘤MG-63細胞凋亡過程中的變化研究.pdf

1、本文在鑒定姜黃素(curcumin，Cur)誘導人成骨肉瘤MG-63細胞凋亡的基礎上，應用選擇性抽提整裝透射電鏡和蛋白質組學分析技術，對MG-63細胞誘導凋亡過程中核基質一中間纖維系統(tǒng)的構型變化和核基質蛋白組成的變化進行系統(tǒng)研究。分析鑒定與腫瘤細胞凋亡相關的特異核基質蛋白，并探索它們在腫瘤細胞凋亡過程中的調控作用，以期能夠在較為整體的水平上進一步認識腫瘤細胞凋亡及其機理，從而找出腫瘤細胞凋亡研究的新方向。 實驗結果顯示，經(jīng)7.5

2、 μ g/mL姜黃素處理之后，人成骨肉瘤MG-63細胞的增殖受到明顯抑制，發(fā)生了G0/G1期阻滯，出現(xiàn)明顯的亞G0/G1期凋亡峰，光鏡和透射電鏡觀察結果顯示，經(jīng)姜黃素誘導處理后的MG-63細胞出現(xiàn)了細胞形態(tài)規(guī)則、核質比例減小、細胞核固縮、核內(nèi)染色質凝聚、線粒體腫脹、內(nèi)質網(wǎng)網(wǎng)腔擴大、出現(xiàn)凋亡小體等顯著的凋亡特征；而且凋亡相關基因bc1-2和突變型p53的表達下調、bax和fas基因的表達上調，并且出現(xiàn)細胞凋亡特征性DNA降解梯狀條帶；選擇

3、性抽提整裝光鏡和電鏡觀察顯示，經(jīng)姜黃素處理的MG-63細胞的核基質和中間纖維比對照組明顯稀疏，且分布更加不均勻，并分別與核纖層連系，形成趨于斷裂但相對還較為完整的網(wǎng)狀結構；雙向凝膠電泳分析顯示在姜黃素誘導MG-63細胞凋亡前后存在27個差異表達的核基質蛋白，經(jīng)質譜分析，鑒定了其中的21個蛋白，其中在凋亡的MG-63細胞中表達上調的蛋白鑒定為：DNA斷裂誘導轉錄子DNA-damage-inducible transcript 4-like

4、、盤狀結構域Discoidin、DNA聚合酶 zeta等7種蛋白；表達下調的蛋白質為：Prohibitin、Glutamatedehydrogenase、Vimentin、Human Nucleophosmin、Heat-shock 70等14種蛋白。其中除Vimentin、Prohibitin、Nucleophosmin和Hsp70外，其余均為首次在核基質中發(fā)現(xiàn)的蛋白質。 研究結果表明，7.5 μg/mL姜黃素對人成骨肉瘤MG