耐熱大豆β-淀粉酶的篩選及其cDNA在大腸桿菌中的表達(dá).pdf

1、β-淀粉酶(EC3.2.1.2)廣泛存在于各種高等植物和微生物中，它能夠作用于多糖的非還原性末端，順次切割相隔的α-1，4糖苷鍵，生成β-旋光的麥芽糖。耐熱淀粉酶在食品及飲料工業(yè)中具有很重要的應(yīng)用價(jià)值，因?yàn)樘岣叻磻?yīng)溫度不僅可以增加淀粉的可溶性，而且可以防止雜菌的生長(zhǎng)，這對(duì)于降低生產(chǎn)成本是十分有利的?！　”緦?shí)驗(yàn)對(duì)184份核心種質(zhì)大豆的酶活力和熱穩(wěn)定性進(jìn)行了測(cè)定。篩選得到的熱穩(wěn)定性最佳的6種酶均具有較寬的作用溫度和作用pH，其中5種酶的半

2、衰期(63℃、pH5.0)超過(guò)5h，表明這些大豆β-淀粉酶具有較好的酶學(xué)特性，極具工業(yè)應(yīng)用價(jià)值?！　∫院Y選得到的大豆總RNA為模板，通過(guò)RT-PCR得到大豆?jié)?9-2492和中黃20的β-淀粉酶基因的cDNA序列(1.5kb)，測(cè)序結(jié)果表明該序列編碼496個(gè)氨基酸。構(gòu)建表達(dá)載體pBMY，并在大腸桿菌中將濟(jì)99-2492的β-淀粉酶cDNA進(jìn)行融合表達(dá)，重組酶的分子量大小為50kD，在30℃誘導(dǎo)，胞內(nèi)酶活力可達(dá)19.61U/mL。活性染