淀粉液化芽孢桿菌中性植酸酶基因在大腸桿菌和畢赤酵母中的高效表達.pdf

1、浙江大學動物科學學院碩士學位論文淀粉液化芽孢桿菌中性植酸酶基因在大腸桿菌和畢赤酵母中的高效表達姓名：陳艷申請學位級別：碩士專業(yè)：動物營養(yǎng)與飼料科學指導教師：孫建義20040501頃上學位論文淀粉液化芽孢桿菌中性植酸酶基因在大腸桿菌和畢赤酵母的高效表達端，構(gòu)成重組表達載體BAPpPIC9K。用電擊法將經(jīng)BglII單酶切線性化的BAPpPIC9K轉(zhuǎn)化入畢赤酵母Gsll5菌株，從而整合到酵母染色體DNA中得到重組轉(zhuǎn)化子。篩選到的基因工程菌經(jīng)培

2、養(yǎng)后，上清液的發(fā)酵活力為4120U／ml，為出發(fā)菌株的109倍。SDS—PAGE凝膠電泳檢測，表達的植酸酶的分子量約為45kDa，這表明植酸酶基因在畢赤酵母得到了高效表達。對兩種表達系統(tǒng)的植酸酶生物學特性研究顯示，EcoliBAPE菌株與PichiapastorisBAPK菌株表達的淀粉液化芽孢桿菌的植酸酶具有相似性，最適反應溫度均為65～70。C，屬嗜熱性酶。其最適反應pH為70～715，在60～75這～范圍內(nèi)，酶活性均在70％以上。

3、pH值穩(wěn)定性結(jié)果表明，植酸酶BAPE和BAPK在pH50～90之間極為穩(wěn)定，殘余酶活在85％以上，而pH低于50時，酶活性迅速下降，到pH為40以下，已無酶活性。熱穩(wěn)定性研究揭示，重組酵母植酸酶BAPK的耐熱性優(yōu)于大腸桿菌植酸酶BAPE，BAPK在70。C和80℃處理2rain，殘余酶活為8054％和6842％，處理10min的殘余酶活分別為7003％和5069％；而植酸酶BAPE在709C和80℃處理2min，殘余酶活為7102％和4