乳腺癌細(xì)胞分泌的骨形成蛋白4影響脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景與目的:骨形成蛋白4(BMP4)是一種細(xì)胞外信號(hào)分子，屬于TGF-β超家族，在乳腺癌細(xì)胞及組織中均存在表達(dá)。體外研究發(fā)現(xiàn)BMP4可抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖，促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移。BMP4可通過(guò)自分泌的機(jī)制與乳腺癌細(xì)胞表面的受體結(jié)合，主要經(jīng)Smad信號(hào)通路發(fā)揮作用。最新研究發(fā)現(xiàn)BMP4亦可作用于乳腺癌微環(huán)境中的成纖維細(xì)胞，促進(jìn)癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移。癌相關(guān)成纖維細(xì)胞(CAFs)是腫瘤微環(huán)境中最主要的成分之一，是腫瘤生長(zhǎng)和進(jìn)展的重要因素，其特

2、征性標(biāo)志物為α-平滑肌動(dòng)蛋白(α-SMA)。有研究證實(shí)，脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞(ADSCs)在乳腺癌細(xì)胞分泌的TGF-β作用下可向CAF-like細(xì)胞分化，促進(jìn)癌細(xì)胞的遷移，且TGF-β不是導(dǎo)致ADSCs在腫瘤環(huán)境中分化為CAF-like的唯一因素。本研究首先明確乳腺癌細(xì)胞系及組織中BMP4的表達(dá)情況，并探索BMP4對(duì)乳腺癌預(yù)后的影響;其次初步探討乳腺癌細(xì)胞分泌的BMP4是否可以影響乳腺周圍脂肪組織來(lái)源的ADSCs向CAF-like細(xì)胞分化，

3、以期發(fā)現(xiàn)BMP4影響乳腺癌進(jìn)展的可能機(jī)制，從而尋找防治乳腺癌的新靶點(diǎn)。
　　方法:應(yīng)用Real-time PCR檢測(cè)乳腺癌細(xì)胞系MCF-7、MDA-MB-231中BMP4mRNA的表達(dá);隨機(jī)選取復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院乳腺疾病研究中心在2008年～2009年收治的乳腺癌患者50例，ER陽(yáng)性、陰性者各25例，統(tǒng)計(jì)臨床病理資料，應(yīng)用免疫組化的方法檢測(cè)50例乳腺癌患者癌組織石蠟標(biāo)本中BMP4的表達(dá)，并分析其與患者臨床病理資料之間的關(guān)系及其對(duì)

4、乳腺癌患者生存預(yù)后的影響。從人乳腺組織周圍的脂肪中分離出hADSCs，建立hADSCs與MCF-7、MDA-MB-231直接共培養(yǎng)的模型，細(xì)胞免疫熒光法檢測(cè)α-SMA的表達(dá)。收集MCF-7、MDA-MB-231的腫瘤條件培養(yǎng)基(TCM)，作用于hADSCs，Real-timePCR和westem blot檢測(cè)α-SMA的表達(dá)。在MCF-7的TCM中加入外源性重組人BMP4蛋白，而在MDA-MB-231的TCM中加入BMP4中和抗體，處理

5、hADSCs后，Real-time PCR和western blot檢測(cè)α-SMA的表達(dá)。
　　結(jié)果:1）乳腺癌細(xì)胞系MCF-7、MDA-MB-231中存在BMP4的表達(dá)，且MDA-MB-231中BMP4的表達(dá)水平高于MCF-7;2）50例乳腺癌患者的癌組織標(biāo)本中有31例(62％)存在BMP4的表達(dá)，BMP4陽(yáng)性表達(dá)組與陰性表達(dá)組的患者僅在組織學(xué)分級(jí)方面顯示出統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.038)，而在發(fā)病年齡、腫瘤的大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TN

6、M分期、手術(shù)方式、病理類型、ER狀態(tài)、PR狀態(tài)、ERBB2狀態(tài)方面并未表現(xiàn)出明顯的差異;3）對(duì)于50例乳腺癌患者，BMP4陽(yáng)性表達(dá)組患者3年、5年無(wú)病生存率(DFS)為90.3％、61.5％，總生存率(OS)為90.3％、87.0％，BMP4陰性表達(dá)組患者3年、5年DFS為94.4％、87.7％，OS為100％、90.0％，兩組患者DFS、OS均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;4）對(duì)于25例ER陽(yáng)性的乳腺癌患者，16例BMP4陽(yáng)性表達(dá)組患者3年、5年DF

7、S為100.0％、83.0％，OS為100.0％、90.0％，9例患者不表達(dá)BMP4，失訪1例，截至隨訪日期未出現(xiàn)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移及死亡患者;5）25例ER陰性乳腺癌患者中，15例患者BMP4陽(yáng)性表達(dá)，3年、5年DFS為80.0％、32.7％，OS為80.0％、73.3％，10例患者不表達(dá)BMP4，3年、5年DFS為90.0％、80.0％，OS為100.0％、85.7％，兩組患者DFS、OS均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;6）hADSCs與MCF-7、MDA-

8、MB-231無(wú)論是直接共培養(yǎng)還是間接共培養(yǎng)，其α-SMA的表達(dá)水平均有所升高，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;7）外源性重組人BMP4蛋白加入MCF-7的TCM中，處理hADSCs，可使其表達(dá)α-SMA的水平明顯高于對(duì)照組;8）中和MDA-MB-231 TCM中BMP4的活性，降低了hADSCs中α-SMA的表達(dá)水平，但仍高于無(wú)血清DMEM培養(yǎng)基下的hADSCs。
　　結(jié)論:本研究證實(shí)了乳腺癌細(xì)胞系及癌組織中存在BMP4的表達(dá)，且癌組織中BM