2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  研究HBV增強(qiáng)Raf1表達(dá)的分子機(jī)制。
  方法:
  1.構(gòu)建Raf1啟動子熒光素酶報告質(zhì)粒和5'缺失的Raf1啟動子熒光素酶報告質(zhì)粒,分別轉(zhuǎn)染入HepG2細(xì)胞,用雙熒光素酶報告分析系統(tǒng)檢測Raf1啟動子活性,以確定Raf1啟動子主要作用區(qū)域。
  2.將構(gòu)建的5'缺失的Raf1啟動子熒光素酶報告質(zhì)粒分別與HBx表達(dá)質(zhì)粒pCMV-sport6-HBx或?qū)φ召|(zhì)粒pCMV-sport6共轉(zhuǎn)染入HepG2

2、細(xì)胞,研究HBx與Raf1啟動子主要作用區(qū)域的關(guān)系,再用RNA干擾的方法抑制HepG2.2.15細(xì)胞中HBx,對結(jié)果進(jìn)行進(jìn)一步驗(yàn)證。
  3.在HepG2.2.15細(xì)胞中,AP-2α表達(dá)質(zhì)粒與5'缺失的Raf1啟動子熒光素酶報告質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染,AP-2α干擾質(zhì)粒與5'缺失的Raf1啟動子熒光素酶報告質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染,分別驗(yàn)證AP-2α對Raf1啟動子活性的影響。
  4.用RT-PCR,Real-Time PCR和Western Bl

3、ot的方法驗(yàn)證在HepG2細(xì)胞和HepG2.2.15細(xì)胞中AP-2α的表達(dá)差異。
  結(jié)果:
  1.熒光素酶活性分析結(jié)果顯示-209~-133bp是Raf1啟動子上的主要作用區(qū)域。
  2.-209~-133bp區(qū)域是HBx增強(qiáng)Raf1啟動子活性過程中主要作用區(qū)域。
  3.轉(zhuǎn)錄因子AP-2α可以增強(qiáng)Raf1啟動子活性,在HepG2.2.15細(xì)胞抑制轉(zhuǎn)錄因子AP-2α后,Raf1啟動子活性明顯下降。
  

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