IRF-1通過Sp1影響Ki-67核心啟動子轉(zhuǎn)錄活性.pdf

1、目的：研究IRF-1通過Sp1影響Ki-67基因核心啟動子轉(zhuǎn)錄活性，為以Ki-67為靶點的腫瘤治療奠定基礎(chǔ)。
　　方法：通過雙熒光素酶活性檢測技術(shù)鑒定72小時內(nèi)Ki-67基因核心啟動子活性的變化趨勢以及IRF-1過表達對其轉(zhuǎn)錄活性的影響；通過RT-PCR和細胞免疫化學技術(shù)檢測IRF-1對Ki-67 mRNA及蛋白水平的影響；通過RT-PCR和Western Blot技術(shù)檢測IRF-1對Ki-67順式作用組件Sp1 mRNA及其蛋白

2、水平的影響。使用雙熒光素報告分析系統(tǒng)檢測Sp1對Ki-67核心啟動子活性的影響；用CCK-8檢測IRF-1過表達對增殖影響；用Annexin V-PI檢測IRF-1過表達對腎細胞癌Ketr-3凋亡影響。
　　結(jié)果：在Ketr-3細胞中IRF-1以劑量依賴的方式抑制Ki-67mRNA及其蛋白的表達；IRF-1以劑量依賴的方式抑制Ki-67順式作用組件Sp1蛋白的表達，而Sp1在mRNA水平無明顯變化。在786-O細胞中當我們使用小干

3、擾沉默IRF-1后Ki-67 mRNA、蛋白，Sp1蛋白表達均上調(diào)，Sp1mRNA表達水平未見明顯變化。在Kerr-3細胞中IRF-1過表達能以時間和劑量依賴的方式抑制Ki-67基因核心啟動的活性，當Ki-67核心啟動子3個Sp1結(jié)合位點全部突變后IRF-1幾乎失去了對其轉(zhuǎn)錄活性的抑制。在Ketr-3細胞中IRF-1過表達能明顯抑制腎癌細胞增殖并促進細胞凋亡。
　　結(jié)論：IRF-1通過Sp1依賴的途徑調(diào)節(jié)Ki-67基因核心啟動子的