中樞IL-1β在母愛剝奪所致海馬神經(jīng)損傷中的作用與機制.pdf

1、目的：在前期研究的基礎(chǔ)上，進一步探討生命早期應(yīng)激海馬神經(jīng)損傷的IL－1β機制。以大鼠母愛剝奪建立人類生命早期應(yīng)激動物模型，檢測母愛剝奪大鼠海馬IL－1β的改變，并通過腹腔注射LPS刺激中樞IL－1β的釋放，從P－CREB、BDNF機制入手，探討IL－1β與海馬神經(jīng)損傷和再生的關(guān)系，并分析可能神經(jīng)生物學(xué)機制,為早期干預(yù)提供科學(xué)依據(jù)。
　　 方法：⑴健康、性成熟清潔級Sprague-Dawley大鼠，體重200-250g，雌雄各1只

2、同籠飼養(yǎng)，待其繁殖，新生雄性大鼠用于實驗研究。⑵健康、雄性性成熟清潔級Sprague-Dawley大鼠，體重200-250g，共20只，分為LPS組和NS組，腹腔注射LPS 225ug/kg一周，隔天一次，對照組腹腔注射等量生理鹽水，第八天乙醚麻醉后冰上斷頭取腦，檢測LPS對海馬IL-1β、P－CREB和BDNF的作用，驗證海馬IL-1β的神經(jīng)損傷機制。⑶海馬P－CREB的檢測采用免疫組化方法、IL－1β和BDNF以ELLISA法測定，

3、海馬神經(jīng)元再生采用Brdu免疫組化測定。⑷實驗數(shù)據(jù)應(yīng)用EXCEL2003和SPSS13.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行統(tǒng)計分析。符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)應(yīng)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x ±S）表示，進行兩獨立樣本的t檢驗；若數(shù)據(jù)不符合正態(tài)分布則應(yīng)用中位數(shù)（四分位數(shù)間距）[M(QR)]表示，進行兩獨立樣本的非參數(shù)檢驗。以P<0.05為差別有顯著性。
　　 結(jié)果：①母愛剝奪組大鼠于出生后的第3-21天和第22-60天分別接受母嬰分離和隔離飼養(yǎng)應(yīng)激，對照組正常飼養(yǎng)

4、，分別在22和61日齡處死大鼠取腦，檢測母愛剝奪對大鼠海馬IL-1β、P－CREB和BDNF的作用。②處死大鼠取腦分離海馬，勻漿后酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測大鼠海馬IL-1β水平。結(jié)果顯示，LPS 腹腔注射組與生理鹽水組大鼠海馬組織中IL-1β水平分別是2.0440±0.3760 和1.3805±0.6032。與生理鹽水組相比，腹腔注射LPS 組大鼠海馬IL-1β水平顯著升高，結(jié)果表明，經(jīng)過腹腔注射LPS 后，大鼠海馬IL-1β水平升高。③石

5、蠟切片免疫組織化學(xué)方法計數(shù)海馬P－CREB水平。結(jié)果顯示，生理鹽水組與LPS 組大鼠海馬組織中P－CREB相對陽性細(xì)胞數(shù)分別是14.50±1.871 和12.00±1.732，與生理鹽水組相比，腹腔注射LPS組大鼠海馬P－CREB數(shù)量顯著減少；結(jié)果表明，經(jīng)過腹腔注射LPS 后，大鼠海馬P－CREB數(shù)量減少。④處死大鼠取腦分離海馬，勻漿后酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測大鼠海馬BDNF水平。結(jié)果顯示，生理鹽水組與LPS組大鼠海馬組織中BDNF 水平分