牙鲆自然殺傷細胞增強因子（NKEF）基因的克隆及其表達分析.pdf

1、自然殺傷細胞增強因子(Naturalkillerenhancingfactor，NKEF)是近年來新發(fā)現(xiàn)的抗氧化劑家族的重要成員，它最早從人的紅細胞中得到分離純化，能夠增強自然殺傷細胞的細胞毒活性，同時在保護機體蛋白質(zhì)和DNA免受氧化劑損傷等方面具有十分重要的作用。本文采用快速擴增cDNA末端(rapidamplificationofcDNAends，RACE)的方法，分離和測定了牙鲆NKEFcDNA的全長核苷酸序列，5'RACE擴增分

2、離得到了400bp左右的片段，3'RACE擴增得到800bp左右的片段，并且擴增出的目的片段都非常特異，經(jīng)過凝膠回收、連接、轉(zhuǎn)化、雙酶切檢測和測序后，剪接得到牙鲆NKEF全長cDNA序列。牙鲆NKEFcDNA全長1028bp(不包含polyA)，其中包括67bp的5'非翻譯區(qū)，597bp的開放閱讀框和364bp的3'非翻譯區(qū)，整個開放閱讀框編碼198個氨基酸，NKEF蛋白分子量22kD，等電點為7.2，在第52位和173位含有兩個半胱氨

3、酸殘基，和其他幾種Ⅰ類抗氧化蛋白家族成員的對比可知，兩個位置的半胱氨酸殘基是非常保守的，并且為該族蛋白發(fā)揮其生物學功能的氨基酸區(qū)域。PCR分析表明NKEF基因在牙鲆所取組織中普遍表達，但是表達水平存在著明顯的差異，并且該基因在脾臟和頭腎中可以被脂多糖的誘導而表達上調(diào)，而在肝臟和小腸中則無此變化，說明了雖然牙鲆NKEF基因在牙鲆組織中均有表達，但是它們表達的模式則根據(jù)組織和刺激物的不同而不同。該基因還隨著牙鲆受精卵的發(fā)育而表達水平逐漸增高