脂肪細胞共培養(yǎng)對HepG2細胞HDL相關蛋白表達的影響.pdf

1、目的：臨床觀察和流行病學資料分析顯示肥胖患者,特別是中心性肥胖并有肝臟脂肪組織聚集(如脂肪肝)時,血漿HDL-C水平降低明顯,但其具體細胞和分子機制尚未明確。目前對脂肪組織的認識已經(jīng)從以前的能量儲存器官更新至具有旺盛內分泌功能的內分泌器官。脂肪細胞是否能通過內分泌或旁分泌的多種細胞因子和活性物質影響與肝臟HDL密切相關的蛋白,進而導致HDL-C水平和功能的異常?本實驗采用細胞共培養(yǎng)模型,探討在與脂肪細胞共培養(yǎng)的情況下,HepG2細胞上與

2、HDL密切相關的apoAI,ApoM,SAA的mRNA及蛋白表達水平是否受影響,從細胞水平推論肥胖與HDL水平及功能異常的機制。
　　方法：采用胰島素、地塞米松、3-異丁基-1-甲基黃嘌呤(IBMX)誘導3T3-L1前脂肪細胞分化成為成熟脂肪細胞。通過Transwell系統(tǒng)(膜孔徑0.4μm)進行HepG2細胞和成熟脂肪細胞的共培養(yǎng),以未分化的3T3細胞共培養(yǎng)以及單獨HepG2細胞培養(yǎng)兩組作為對照。共培養(yǎng)48小時后收集HepG2細

3、胞,提取RNA和蛋白,Western Blot檢測apoAI、ApoM蛋白水平和RT-PCR檢測SAA基因mRNA水平。
　　結果：1.采用Transwell系統(tǒng)成功建立3T3-L1脂肪細胞和人肝癌細胞株HpeG2細胞共培養(yǎng)的實驗模型;2.免疫印跡(Western Blot)顯示,與對照組比較,分化成熟的脂肪細胞共培養(yǎng)抑制HpeG2細胞apoAI、ApoM蛋白表達。3.RT-PCR分析顯示,與對照組比較,共培養(yǎng)使HpeG2細胞SA