新生小鼠卵巢移植片培育MⅡ卵制備胚胎干細胞.pdf

1、目的：
　　1.建立從原始卵泡培育具有良好發(fā)育潛能的MⅡ卵的組織工程技術方案；
　　2.從原始卵泡培育MⅡ卵制備胚胎干細胞；
　　3.為人卵巢工程建立實驗基礎。
　　方法：
　　新生0.5d小鼠卵巢切片異體移植到成年母鼠腎被膜下，21天后對宿主腹腔注射PMSG10IU/只，給藥44h后用機械穿刺法收獲卵巢移植物中的卵冠丘復合體，再通過體外成熟培養(yǎng)16h，得到的IVM-MⅡ卵進行體外受精，受精卵發(fā)育至囊胚時從

2、內細胞團制備小鼠胚胎干細胞，并對建立的干細胞系進行鑒定。
　　結果：
　　從移植切片卵巢所獲COCs在體外成熟后得到IVM-MⅡ卵，可受精并發(fā)育至囊胚分離出ICM，成功制備1批胚胎干細胞并傳至P4代，并通過畸胎瘤、堿性磷酸酶染色、SSEA-1和嵌合體實驗對建立的胚胎干細胞完成鑒定。
　　結論：
　　本實驗報道證實了新生鼠卵巢（卵泡募集前卵巢）切片異體移植聯(lián)合體外成熟培養(yǎng)獲得的成熟卵（MⅡ卵）具有很好的發(fā)育潛能，可