對(duì)蝦WSSV RNAi技術(shù)建立及初步應(yīng)用.pdf

1、背景：對(duì)蝦白斑綜合征病毒W(wǎng)SSV(WhiteSpotSyndromeVirus)已成為養(yǎng)殖對(duì)蝦的—主要病原，給對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大損失，弄清其侵染機(jī)理是有效防治的基礎(chǔ)。本試驗(yàn)使用RNAi的方法對(duì)其幾個(gè)重要蛋白的基因進(jìn)行了研究，分析這幾個(gè)基因被干涉掉后對(duì)WSSV侵染的影響。這幾個(gè)基因分別是DNA聚合酶基因、核苷酸還原酶基因、胸苷激酶基因、胸苷酸激酶基因、衣殼蛋白VP24基因和囊膜蛋白VP28基因，RNAi是一種新的并極為有效的基因功能研究

2、方法。方法：使用針對(duì)于每個(gè)蛋白基因的裸siRNA在凡納對(duì)蝦體內(nèi)降低目的基因的表達(dá)。用半定量RT-PCR檢測(cè)基因表達(dá)量。用對(duì)蝦死亡狀況和熒光定量PCR來(lái)鑒定各基因的沉默對(duì)WSSV侵染的影響。結(jié)果：試驗(yàn)數(shù)據(jù)表明siRNA在蝦體內(nèi)顯著地降低了目的基因地表達(dá)量和WSSV的擴(kuò)增速度，并且對(duì)延緩對(duì)蝦的死亡也起到一定作用。結(jié)論：特異的siRNA有效地抑制了WSSV基因地表達(dá)。DNA聚合酶、核苷酸還原酶、胸苷酸激酶、衣殼蛋白VP24和囊膜蛋白VP28對(duì)