低氧預(yù)處理通過(guò)FKHRL1、AFX轉(zhuǎn)錄因子對(duì)成年大鼠短暫性全腦缺血保護(hù)作用的研究.pdf

1、背景與目的：不同預(yù)處理形式可以誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物對(duì)缺血產(chǎn)生耐受。先前的研究發(fā)現(xiàn)，在成年Wistar大鼠全腦缺血10min前2天給予30-60min濃度為8％的低氧預(yù)處理，可以使后續(xù)發(fā)生的短暫性全腦缺血后海馬CA1區(qū)神經(jīng)元死亡減少。FKHRL1、AFX轉(zhuǎn)錄因子對(duì)缺血后神經(jīng)元的存活發(fā)揮重要作用，但成年雄性Wistar大鼠低氧預(yù)處理（8％O2）全腦缺血模型的缺血耐受機(jī)制中是否有該轉(zhuǎn)錄因子的參與目前未見(jiàn)報(bào)道。本研究在原來(lái)已建立的成年雄性Wistar大

2、鼠低氧預(yù)處理（8％O2）全腦缺血模型的基礎(chǔ)上，分別選擇不同的低氧預(yù)處理時(shí)間及不同的低氧預(yù)處理與后續(xù)全腦缺血間隔時(shí)間，確定最佳的低氧預(yù)處理?xiàng)l件；觀察低氧預(yù)處理介導(dǎo)的FKHRL1、AFX轉(zhuǎn)錄因子活性的改變；進(jìn)一步應(yīng)用PI3-K選擇性抑制劑LY294002，觀察FKHRL1、AFX轉(zhuǎn)錄因子活性的改變及探討低氧預(yù)處理對(duì)成年大鼠全腦缺血神經(jīng)保護(hù)作用，進(jìn)一步闡明FKHRL1、AFX轉(zhuǎn)錄因子對(duì)成年大鼠低氧預(yù)處理全腦缺血后神經(jīng)存活的影響及低氧預(yù)處理對(duì)成

3、年大鼠短暫全腦缺血神經(jīng)保護(hù)作用的潛在機(jī)制。 材料與方法：選取年齡20-25周，體重200-300g的雄性Wistar大鼠。低氧預(yù)處理采用在密閉防潮箱內(nèi)持續(xù)通入8％O2+92％N2混合氣體。全腦缺血模型采用Pulsinelli經(jīng)典的四血管阻塞模型。選擇不同的低氧預(yù)處理時(shí)間及不同的低氧預(yù)處理與后續(xù)全腦缺血間隔時(shí)間，尼氏染色評(píng)估海馬CA1神經(jīng)元損傷情況，確定最佳的低氧預(yù)處理?xiàng)l件。通過(guò)Western blot、免疫組化方法觀察缺血組、預(yù)

4、處理-缺血組的不同再灌注時(shí)間點(diǎn)海馬CA1區(qū)FKHRL1、AFX轉(zhuǎn)錄因子磷酸化水平的變化，并進(jìn)一步應(yīng)用PI3-K選擇性抑制劑LY294002，尼氏染色證實(shí)低氧預(yù)處理對(duì)成年大鼠全腦缺血神經(jīng)保護(hù)作用的變化及Western blot觀察FKHRL1、AFX轉(zhuǎn)錄因子磷酸化水平的改變。 結(jié)果： （1）在成年大鼠全腦缺血10min前2d給予30-120min濃度為8％的低氧預(yù)處理，可以使后續(xù)發(fā)生的短暫性全腦缺血后海馬CA1區(qū)神經(jīng)元死亡

5、減少； （2）低氧預(yù)處理與全腦缺血間隔1-4d能產(chǎn)生缺血耐受； （3）最大的神經(jīng)保護(hù)作用是在全腦缺血10min前1d給予30min濃度為8％的低氧預(yù)處理； （4）在單純?nèi)毖M，與Sham比較，短暫全腦缺血再灌注0小時(shí)，P-FKHRL1（Ser253）和P-AFX（Ser197）出現(xiàn)顯著下降，到再灌注4小時(shí)，兩者均短暫地顯著上升，到再灌注24小時(shí)以及48小時(shí)，其磷酸化水平持續(xù)下降。在低氧預(yù)處理組：再灌注0小時(shí)，P-

6、FKHRL1（Ser253）和P-AFX（Ser197）的變化與單純?nèi)毖M相類(lèi)似，出現(xiàn)顯著的下降，但預(yù)處理組的FKHRL1、AFX磷酸化水平下降趨勢(shì)比單純?nèi)毖M持續(xù)時(shí)間更長(zhǎng)（持續(xù)至再灌注4小時(shí)）。到再灌注24小時(shí)以及48小時(shí)，其磷酸化水平持續(xù)升高。單純?nèi)毖踅M在單純低氧后24h P-FKHRL1（Ser253）和P-AFX（Serl97）顯著上升。FKHRL1、AFX蛋白水平在各組均未見(jiàn)明顯變化。 （5）低氧預(yù)處理前30min腦室

7、注射LY294002使低氧預(yù)處理-缺血組在再灌注24h P-FKHRL1（Ser2533）和P-AFX（Ser197）明顯減少，海馬CA1區(qū)神經(jīng)元損傷明顯。 結(jié)論： （1）在成年大鼠全腦缺血10min前1-4d給予30-120min濃度為8％的低氧預(yù)處理，可以使后續(xù)發(fā)生的短暫性全腦缺血后海馬CA1區(qū)神經(jīng)元死亡減少，其中低氧30min間隔1d神經(jīng)保護(hù)最明顯； （2）FKHRL1、AFX轉(zhuǎn)錄因子參與了低氧預(yù)處理對(duì)成年