人參葉多糖的系統(tǒng)分級(jí)和抗腫瘤活性研究.pdf

1、人參(Panax ginseng C.A.Meyer)是我國(guó)傳統(tǒng)名貴中藥,具有多種功效。多糖是人參的有效成分之一,具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤和降血糖等生物活性。人參根雖有極高的藥用價(jià)值,但4～6年才收獲一次。而人參葉每年都有收獲,卻沒有得到充分的利用。目前,有關(guān)人參葉多糖的研究報(bào)道已有近20余篇,主要集中在單一級(jí)分的分離純化、結(jié)構(gòu)分析及生物活性等方面,還缺乏對(duì)人參葉多糖全面系統(tǒng)的分析。本文用水提方法制備了人參葉水溶性多糖,乙醇沉淀、凝膠過濾和

2、離子交換層析等方法對(duì)水溶性人參葉多糖進(jìn)行了系統(tǒng)的分級(jí),全面分析了各種級(jí)分的單糖組成、分子量分布,初步分析了各種級(jí)分可能的結(jié)構(gòu)特征,并對(duì)各級(jí)分的免疫調(diào)節(jié)和抗腫瘤活性進(jìn)行了研究,研究結(jié)果如下:
　　 干燥的人參葉經(jīng)過熱水煮提、乙醇沉淀、Sevag法脫蛋白得到人參葉水溶性粗多糖GL,HPLC分析GL的單糖組成為Gal、Ara、GalA、Glc、Man和Rha。GL經(jīng)過DEAE-Cellulose離子交換柱層析分級(jí),得到四個(gè)多糖級(jí)分GL

3、N、GLA-1、GLA-2、GLA-3。
　　 中性糖含量較高的級(jí)分GLN為不均一的多糖混合物,通過DEAE-SepharoseFF柱層析分級(jí)得到四個(gè)級(jí)分GLN-1、GLN-2、GLN-3和GLN-4。GLN-1主要由Gal、Ara、Glc和Man組成,糖含量81.5％,其Gal與Ara的摩爾比接近1:1,推測(cè)GLN-1是AG型果膠,分子量大約為4000 Da；GLN-2主要由Gal、Ara、Glc、Man和GalA組成,糖含量

4、86.9％,糖醛酸含量7.7％,分子量大約為9600Da；GLN-3主要由Gal、Ara、GalA、Glc和Man組成,糖含量為65.4％,糖醛酸含量為22.9％,GLN-3在Sepharose CL-6B上呈現(xiàn)兩個(gè)峰,分子量分別為80000Da和6500 Da。GLN-4的單糖組成與GLN-3相似,糖含量為45.1％,糖醛酸含量為17.6％,GLN-4在Sepharose CL-6B上也呈現(xiàn)兩個(gè)峰,分子量分別是47000Da和1000

5、0 Da。
　　 GLA-1主要含有GalA、Gal和Ara,且GalA含量高達(dá)45.1％,推測(cè)GLA-1為HG型果膠。GLA-2主要含有Gal、Ara、Rha和GalA,且Rha和GalA含量較高,推測(cè)GLA-2是RG-Ⅰ型果膠。通過DEAE-Sepharose FF柱層析將GLA-1進(jìn)一步分級(jí),得到四個(gè)級(jí)分GLA-1aa、GLA-1ab、GLA-1b和GLA-1c,通過HPLC和Sephadex G-75柱層析測(cè)定各級(jí)分的單

6、糖組成和分子量分布。GLA-1aa級(jí)分主要含有Gal,Ara,Glc和Man,其收率很低。GLA-1ab、GLA-1b和GLA-1c主要由Gal、Ara、GalA和Rha構(gòu)成。根據(jù)GLA-1ab和GLA-1b的單糖組成摩爾比分析,推測(cè)其可能為RG-Ⅰ型果膠。GLA-1c的GalA含量為78.1％,推測(cè)其可能為HG型果膠。
　　 應(yīng)用MTT法檢測(cè)人參葉多糖在體外對(duì)人結(jié)腸癌HT-29和HCT116細(xì)胞增殖的抑制作用。結(jié)果表明人參葉多

7、糖GL、GLA-1和GLA-3對(duì)HT-29和HCT116細(xì)胞,尤其是高轉(zhuǎn)移性的HCT116細(xì)胞增殖有顯著的抑制作用,且呈濃度依賴關(guān)系。通過PI單染流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期對(duì)其機(jī)制進(jìn)行深入的研究,發(fā)現(xiàn)人參葉多糖誘導(dǎo)HCT116細(xì)胞阻滯在G0／G1期。
　　 采用劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)人參葉多糖對(duì)L929細(xì)胞的遷移作用,發(fā)現(xiàn)人參葉多糖各級(jí)分對(duì)細(xì)胞遷移均有濃度依賴性的抑制作用。其中人參葉多糖GL的抑制作用最強(qiáng),可能各級(jí)分之間存在著協(xié)同作用。