可視化人鼻咽癌動物轉(zhuǎn)移模型的建立.pdf

1、中南大學(xué)博士學(xué)位論文可視化人鼻咽癌動物轉(zhuǎn)移模型的建立姓名：劉騰飛申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：姚開泰20050501中南大學(xué)博士論文一利用陽離子脂質(zhì)體Lipofect鯽ine“2000將質(zhì)粒pEGFP—Nl轉(zhuǎn)染人鼻咽癌細(xì)胞(cNE2、5—8F、6—10B)，通過G418抗性篩選、亞克隆獲得了G418抗性克隆。采用PcR、RTPcR、免疫印跡等方法檢測細(xì)胞中的BGFP表達(dá)，結(jié)果顯示：即使在不施加G418的情況下，EG

2、FP在cNE2一EGFP、5—8FEGFP、6—10B噸GFP細(xì)胞中也能穩(wěn)定表達(dá)，說明我們已成功地建立了非G418依賴的、穩(wěn)定表達(dá)EGFP的人鼻咽癌細(xì)胞系(cNE2一EGFP、5—8F噸GFP、6一loB—EGFP)。進(jìn)一步通過繪制細(xì)胞生長曲線、采用流式細(xì)胞計(jì)數(shù)儀分析細(xì)胞周期分布及裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)，我們發(fā)現(xiàn)EGFP轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系(cNE2一EGFP、5罐FEGFP、6一lOB_EGFP)與轉(zhuǎn)染前的細(xì)胞系(cNE2、5～8F、6—10B)在生長

3、速度、細(xì)胞周期分布和裸鼠成瘤能力等方面沒有明顯差異，均保持了原來細(xì)胞自身的生物學(xué)特性。這些穩(wěn)定表達(dá)EGFP的鼻咽癌細(xì)胞系是理想的可視化人鼻咽癌動物模型研究的細(xì)胞材料。利用腫瘤細(xì)胞表達(dá)EGFP的特點(diǎn)，借助整體熒光成像系統(tǒng)LT一9凇cIMsYsPLUs結(jié)合IPP51軟件比較分析發(fā)現(xiàn)，裸鼠皮下接種cNE2一EGFP、5—8F—EGFP細(xì)胞形成的腫瘤瘤體長徑達(dá)到5啪的平均時間為5—7天；而裸鼠皮下接種6—10B—EGFP細(xì)胞形成的腫瘤瘤體長徑達(dá)

4、到5咖的平均時間為10一13天；cNE2一EGFP、5—8F—EGFP細(xì)胞形成的腫瘤瘤體增長迅速；而6—10BEGFP細(xì)胞形成的腫瘤瘤體增長比較緩慢。二通過裸鼠皮下、爪墊接種cNE2一EGFP、5—8F—EGFP、6一10B—EGFP細(xì)胞，借助整體熒光成像系統(tǒng)觀察，我們發(fā)現(xiàn)皮下、爪墊移植瘤成瘤率為100％，但無一例發(fā)生轉(zhuǎn)移，移植瘤可見完整的包膜。此外，由于cNE2一EGFP、5—8F—EGFP和6—10B—EGFP細(xì)胞形成的移植瘤能夠發(fā)

5、出明亮的綠色熒光，而腫瘤誘生的宿主新生血管是不能夠發(fā)熒光的，因此在腫瘤瘤體明亮熒光的襯托下，借助整體熒光成像系統(tǒng)LT一9她cI艟SYSPLUs，我們可以清楚地看至Ⅱ裸鼠移植瘤誘生的宿主新生微血管。由此可見，皮下、爪墊可視化人鼻咽癌移植瘤模型也是理想的裸鼠人鼻咽癌血管形成的模型，這對于研究通過抑制腫瘤血管生成來達(dá)到治療鼻咽癌的目的將具有一定的意義。經(jīng)過不斷探索和改進(jìn)，我們成功地進(jìn)行了裸鼠鼻咽原位接種人鼻咽癌細(xì)胞(cNE2一EGFP、5—8