11420.基于適體技術(shù)化學(xué)發(fā)光檢測(cè)生物小分子腺苷

1、分類號(hào)：密級(jí)：UDC：學(xué)號(hào)：405805611034南昌大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文基于基于適體技術(shù)適體技術(shù)化學(xué)發(fā)光檢測(cè)化學(xué)發(fā)光檢測(cè)生物小分子生物小分子腺苷腺苷BasedonAptamerChemiluminescenceDetectionofSmallBiomoleculesLikeAdenosine魯盧培養(yǎng)單位（院、系）：環(huán)境與化學(xué)工程學(xué)院指導(dǎo)教師姓名、職稱：肖鑒謀教授申請(qǐng)學(xué)位的學(xué)科門類：工學(xué)學(xué)科專業(yè)名稱：化學(xué)工藝論文答辯日期：2014年

2、月日答辯委員會(huì)主席：評(píng)閱人：2014年月日摘要I摘要本論文是基于適體技術(shù)化學(xué)發(fā)光檢測(cè)生物小分子腺苷的研究，主要以腺苷為研究對(duì)象，羧基修飾的磁性微球作為分離載體，通過氨羧反應(yīng)將適體連接于磁性微球上，再通過堿基配對(duì)原則連接上報(bào)告序列，由于配體腺苷的競(jìng)爭(zhēng)作用，導(dǎo)致連接于磁性微球上的化學(xué)發(fā)光物質(zhì)減少，信號(hào)減弱，從而間接實(shí)現(xiàn)腺苷的檢測(cè)。論文通過實(shí)驗(yàn)構(gòu)建了三種檢測(cè)方法，具體實(shí)驗(yàn)方法如下:第一種檢測(cè)方法是使用辣根過氧化物酶化學(xué)發(fā)光體系檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)優(yōu)化了

3、羧基修飾的磁性微球、氨基適體、和鏈霉親和素修飾辣根過氧化物酶的量、考察了尿苷、胞苷及鳥苷對(duì)腺苷適體的選擇性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)腺苷濃度在1109molL～10?4molL范圍內(nèi)，化學(xué)發(fā)光信號(hào)和腺苷濃度線性關(guān)系良好，腺苷的最低檢測(cè)濃度達(dá)到1pmolL；并對(duì)實(shí)際尿樣也進(jìn)行了檢測(cè)和回收率實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明該法具有一定的可行性；第二種檢測(cè)方法采用液溴金納米粒子化學(xué)發(fā)光體系檢測(cè)，建立了基于適體金納米粒子化學(xué)發(fā)光檢測(cè)腺苷的新技術(shù)，實(shí)驗(yàn)優(yōu)化了羧基修飾的磁性微球、氨

4、基適體、報(bào)告序列和金納米粒子標(biāo)記鏈霉親和素金的量，最后在進(jìn)行了選擇性實(shí)驗(yàn)后對(duì)實(shí)際尿樣中的腺苷進(jìn)行了檢測(cè)，此外論文中的金納米粒子是通過檸檬酸鈉還原氯金酸制備的，通過螯合反應(yīng)制備鏈霉親和素標(biāo)記金納米粒子。實(shí)現(xiàn)化學(xué)發(fā)光間接檢測(cè)生物小分子腺苷；第三種檢測(cè)方法是在上部分研究的基礎(chǔ)上，建立了金納米粒子經(jīng)羥胺氯金酸體系放大，使魯米諾化學(xué)發(fā)光體系發(fā)光的催化能力顯著增大，從而達(dá)到提高靈敏度的作用。同樣對(duì)實(shí)驗(yàn)中所需反應(yīng)條件進(jìn)行了優(yōu)化考察和選擇性實(shí)驗(yàn)。同時(shí)在