14057.唐魚卵黃蛋白原啟動(dòng)子調(diào)控綠色熒光蛋白表達(dá)的重組酵母的構(gòu)建

1、華南師范大學(xué)碩士學(xué)位論文唐魚卵黃蛋白原啟動(dòng)子調(diào)控綠色熒光蛋白表達(dá)的重組酵母的構(gòu)建陳純純導(dǎo)師姓名職稱：馬廣智教授院系：生命科學(xué)學(xué)院專業(yè)：水生生物學(xué)答辯日期：二零一三年五月二十五日摘要唐魚卵黃蛋白原啟動(dòng)子調(diào)控綠色熒光蛋白表達(dá)的重組酵母的構(gòu)建摘要專業(yè)名稱：申請者姓名：導(dǎo)師姓名：水生生物學(xué)陳純純馬廣智教授本論文利用唐魚卵黃蛋白原啟動(dòng)子和唐魚雌激素受體片段，以雙載體表達(dá)的方式構(gòu)建對雌激素活性物質(zhì)刺激敏感的基因重組酵母AHl09／tERapr2GF

2、P，初步建立一種可用于檢測環(huán)境雌激素的分子生物學(xué)方法。旨在能夠快速篩選環(huán)境雌激素類的化合物。本研究主要包含三部分內(nèi)容：(一)構(gòu)建含有唐魚卵黃蛋白原啟動(dòng)子的報(bào)告載體。從已知的3條啟動(dòng)子序列中挑選合適片段，以唐魚基因組DNA為模板，設(shè)計(jì)帶有酶切位點(diǎn)的特異性引物，PCR克隆出唐魚卵黃蛋白原啟動(dòng)子promoter2片段，將其插入克隆載體pMD181simplevector。再將該克隆片段插入pEGFPN1vector中，構(gòu)建由唐魚卵黃蛋白原啟動(dòng)

3、子promoter2調(diào)控的EGFP基因(EGFP)的雌激素作用報(bào)告載體pEGFP／pr2。將該質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌，對轉(zhuǎn)化子進(jìn)行PCR與抽提質(zhì)粒雙酶切鑒定，結(jié)果顯示有目的片段的特異條帶，證實(shí)promoter2已成功插入pEGFPN1vector中。(二)在表達(dá)載體中，將唐魚雌激素受體基因片段插入載體pGADT7中，利用載體上的乙醇脫氫酶1啟動(dòng)子(ADHl)驅(qū)動(dòng)Gt唐魚雌激素受體基因(tERa)表達(dá)。在報(bào)告載體中，用唐魚卵黃蛋白原啟動(dòng)子片段2