191.昆蟲幾丁質脫乙?；竍mcda1和ofcda1的性質研究

1、碩士學位論文昆蟲幾丁質脫乙?；窧mCDAl和OfCDAl的性質研究BiochemicalcharacterizationoftheinsectchitindeacetylasesBmCDAlandOfCDAl學號：21218096完成日期：2015年5月大連理工大學DalianUniversityofTechnology大連理工大學碩士學位論文摘要幾丁質脫乙?；笇儆谔酋ッ?家族，能催化幾丁質的乙酰氨基水解生成殼聚糖。昆蟲幾丁質脫乙酰

2、基酶1(CDAl)主要在昆蟲蛻皮過程的表皮中表達，很可能參與新表皮中幾丁質的裝配過程，因此具有重要的生理功能。本文以鱗翅目模式生物家蠶的BmCDAl和農業(yè)害蟲亞洲玉米螟的OfCDAl為研究對象，主要取得以下研究結果：1利用PCR分別調取了家蠶和亞洲玉米螟中的BmCDAl和OfCDAl基因。BmCDAl和OfCDAl的開放閱讀框分別為1620bp和1617bp。進化分析表明，BmCDAl和OfCDAl同屬于昆蟲GroupI幾丁質脫乙?；?/p>

3、，序列一致性高達96％，說明鱗翅目昆蟲CDAl可能具有很高的保守性。與真菌及細菌來源的幾丁質脫乙?；敢粯?，序列分析表明兩者含有5個與催化相關的保守基序。2BmCDAl的基因轉錄水平研究表明，在不同組織中，Bm∞爿J在表皮中表達量最高；在不同發(fā)育過程中，BmCDAl在蛹期表達量明顯升高。說明該酶主要存在于表皮中并且在化蛹時發(fā)揮重要功能。注射蛻皮激素12h后BmCDAJ表達量發(fā)生上調，說明該基因的表達受蛻皮激素的調控。3選擇不同的表達系統

4、對不同來源的CDA進行重組表達。在大腸桿菌中，BmCDAl以包涵體形式表達，未能實現分離純化；在畢赤酵母中，BmCDAl和OfCDAl能夠表達，甲醇誘導144h后，可以通過硫酸銨沉淀和金屬螯合層析兩步從發(fā)酵液上清中純化獲得重組蛋白。4采用熒光胺法和3甲基一2苯并噻唑酮腙法對重組表達的CDA活性進行檢測，結果表明：BmCDAl沒有檢測出酶活性。但幾丁質結合實驗發(fā)現，BmCDAl具有結合膠體幾丁質的能力。關鍵詞：幾丁質；幾丁質脫乙?；福恢?/p>