昆蟲幾丁質(zhì)脫乙?；竍mcda1和ofcda1的性質(zhì)研究

1、碩士學位論文昆蟲幾丁質(zhì)脫乙?；窧 m C D A l 和O f C D A l 的性質(zhì)研究B i o c h e m i c a l c h a r a c t e r i z a t i o no f t h e i n s e c tc h i t i nd e a c e t y l a s e sB m C D A l a n d O f C D A l學 號： 2 1 2 1 8 0 9 6完成日期： 2 0 1 5 年5

2、月大連理工大學D a l i a n U n i v e r s i t y o f T e c h n o l o g y大連理工大學碩士學位論文摘 要幾丁質(zhì)脫乙?；笇儆谔酋ッ? 家族，能催化幾丁質(zhì)的乙酰氨基水解生成殼聚糖。昆蟲幾丁質(zhì)脫乙酰基酶1 ( C D A l ) 主要在昆蟲蛻皮過程的表皮中表達，很可能參與新表皮中幾丁質(zhì)的裝配過程，因此具有重要的生理功能。本文以鱗翅目模式生物家蠶的B m C D A l 和農(nóng)業(yè)害蟲亞洲玉米螟的

3、O f C D A l 為研究對象，主要取得以下研究結(jié)果：1 ．利用P C R 分別調(diào)取了家蠶和亞洲玉米螟中的B m C D A l 和O f C D A l 基因。B m C D A l 和O f C D A l 的開放閱讀框分別為1 6 2 0 b p 和1 6 1 7 b p 。進化分析表明，B m C D A l和O f C D A l 同屬于昆蟲G r o u p I 幾丁質(zhì)脫乙酰基酶，序列一致性高達9 6 ％，說明鱗翅目昆蟲

4、C D A l 可能具有很高的保守性。與真菌及細菌來源的幾丁質(zhì)脫乙?；敢粯?，序列分析表明兩者含有5 個與催化相關(guān)的保守基序。2 ．B m C D A l 的基因轉(zhuǎn)錄水平研究表明，在不同組織中，B m ∞爿J 在表皮中表達量最高；在不同發(fā)育過程中，B m C D A l 在蛹期表達量明顯升高。說明該酶主要存在于表皮中并且在化蛹時發(fā)揮重要功能。注射蛻皮激素1 2h 后B m C D A J 表達量發(fā)生上調(diào)，說明該基因的表達受蛻皮激素的調(diào)控

5、。3 ．選擇不同的表達系統(tǒng)對不同來源的C D A 進行重組表達。在大腸桿菌中，B m C D A l 以包涵體形式表達，未能實現(xiàn)分離純化；在畢赤酵母中，B m C D A l 和O f C D A l能夠表達，甲醇誘導1 4 4 h 后，可以通過硫酸銨沉淀和金屬螯合層析兩步從發(fā)酵液上清中純化獲得重組蛋白。4 ．采用熒光胺法和3 ．甲基一2 ．苯并噻唑酮腙法對重組表達的C D A 活性進行檢測，結(jié)果表明：B m C D A l 沒有檢測出