28615.書(shū)虱谷胱甘肽s轉(zhuǎn)移酶的純化及生化毒理學(xué)特性研究

1、西南大學(xué)博士學(xué)位論文書(shū)虱谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶的純化及生化毒理學(xué)特性研究姓名：豆威申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專(zhuān)業(yè)：農(nóng)業(yè)昆蟲(chóng)與害蟲(chóng)防治指導(dǎo)教師：王進(jìn)軍20090501西南大學(xué)博士學(xué)位論文1t_m蔓皇曼量曼|蔓曼皇曼E曼曼量量蔓皇量雖曼量量量曼曼量■|詈舅|量量囊量曼量置■|量魯皇皇皇曼曼曼曼量曼量量鼉曼皇曼曼皇皇曼曼曼量曼曼量量量皇置●■—量一GSTsN端氨基酸序列高度一致，表明純化獲得的GSTs屬于昆蟲(chóng)Sigma類(lèi)。嗜卷書(shū)虱3個(gè)品系GSTs的純化倍數(shù)

2、在6291倍之間，回收率介于2741％。利用微量滴度酶標(biāo)板法對(duì)純化后的GSTs的生化特性分析表明，與SS品系相比，DDVPR和PH3R品系的GSTs活性顯著提高(P005)。進(jìn)一步的動(dòng)力學(xué)比較研究發(fā)現(xiàn)，以CDNB為底物時(shí)，DDVPR品系的‰值最高；而以GSH為底物時(shí)，兩抗性品系‰值較低，說(shuō)明DDVP和PH3的脅迫選擇造成GSTs對(duì)內(nèi)源性化合物GSH獲得了較高的親和能力；對(duì)‰，而言，兩抗性品系的‰。值均高于敏感品系，說(shuō)明其催化能力提高。嗜

3、卷書(shū)虱3個(gè)品系GSTs活力隨pH／篷i變化的趨勢(shì)大體相同，其ss品系GSTs的展適pH范圍較廣，介于pH70pH802_問(wèn)，而兩抗性品系的最適范圍介于pH70pH75之間。酶促反應(yīng)最適溫度研究發(fā)現(xiàn)，SS和PH3R品系在35。C時(shí)GSTs活力最高，而DDVPR品系則在40。C時(shí)GSTs的活力最高。殺蟲(chóng)劑對(duì)嗜卷書(shū)虱3個(gè)品系GSTs的離體作用研究表明，供試的殺蟲(chóng)劑中丁硫克百威對(duì)嗜卷書(shū)虱3個(gè)品系的GSTs的抑制作用明顯，3品系間相比較PH3R品

4、系GSTs對(duì)丁硫克百威的抑制作用敏感度低，抑制中濃度場(chǎng)分別為ss和DDVPR品系的39和47倍。毒死蜱和高效氯氰菊酯對(duì)嗜卷書(shū)虱的GSTs僅有部分的抑制作用，毒死蜱在低濃度時(shí)還表現(xiàn)為一定的激活作用。利尿酸、姜黃素和四溴磺酚鈉對(duì)嗜卷書(shū)虱純化后的GSTs均有顯著的離體抑制作用。其中，姜黃素的抑制作用最強(qiáng)，其‰達(dá)納摩爾數(shù)量級(jí)。綜合分析，SS品系與兩抗性品系相比對(duì)上述抑制劑更為敏感，兩抗性品系GSTs對(duì)各抑制劑的敏感性存在一定的差異。2嗜卷書(shū)虱不

5、同發(fā)育階段GSB的純化及生化毒理學(xué)特性解析采用GlutathioneSepharose413親和層析法純化了嗜卷書(shū)虱3個(gè)發(fā)育階段(12齡低齡若蟲(chóng)、34齡高齡若蟲(chóng)和成蟲(chóng))的GSTs。結(jié)果表明，低齡若蟲(chóng)GSTs的純化倍數(shù)最高，達(dá)102倍，但回收率僅為28％；高齡若蟲(chóng)GSTs的純化倍數(shù)最低，僅為63倍，但回收率高達(dá)61％；成蟲(chóng)GSTs的純化倍數(shù)介于低齡和高齡若蟲(chóng)之間，其GSTs的比活力最高，且顯著高于低齡若蟲(chóng)(P005)。以GSH和CDNB為

6、底物的動(dòng)力學(xué)特性分析發(fā)現(xiàn)，低齡若蟲(chóng)GSTs的墨值最低，而成蟲(chóng)GS儆于兩底物均表現(xiàn)最高的催化反應(yīng)速度‰。，表明成蟲(chóng)期GSTs對(duì)底物的催化能力顯著高于若蟲(chóng)期。毒死蜱對(duì)嗜卷書(shū)虱不發(fā)育階段GSTs純化后的離體作用結(jié)果表明，該藥劑對(duì)GSTs有一定的抑制作用，但在低濃度時(shí)表現(xiàn)為一定的激活作用，隨著濃度的升高，抑制作用逐漸顯現(xiàn)。在測(cè)試的5個(gè)濃度下，毒死蜱對(duì)GSTs的最高抑制率僅為39％。5種典型化合物(利尿酸、姜黃素、雙硫侖、馬來(lái)酸二乙酯和四溴磺酚鈉