胚乳中不表達(dá)基因組片段的分離及磷代謝的品種差異分析.pdf

1、對(duì)水稻進(jìn)行品質(zhì)改良,轉(zhuǎn)基因技術(shù)是目前被廣泛使用的一種行之有效的方法.在外源基因上連上水稻自身的啟動(dòng)子不僅能夠?qū)崿F(xiàn)外源基因在受體體內(nèi)的定向表達(dá),還從某種程度上緩解了外源基因在受體體內(nèi)表達(dá)沉默的問(wèn)題.在該實(shí)驗(yàn)中利用該室構(gòu)建的平衡化明恢63全生育期cDNA文庫(kù)點(diǎn)陣膜來(lái)進(jìn)行在胚乳中特異性不表達(dá)的cDNA克隆的篩選,分別用來(lái)自水稻不同器官中的RNA反轉(zhuǎn)錄制成放射性cDNA探針與cDNA點(diǎn)陣雜交,通過(guò)比較不同探針與點(diǎn)陣雜交所得到的雜交圖像,得到了一

2、批在胚乳中特異性不表達(dá)的克隆,對(duì)它們進(jìn)行Northern檢測(cè)和序列分析,從中挑選出編碼水稻光系統(tǒng)Ⅱ10KDa蛋白前體的cDNA克隆EI＃44P17來(lái)制備探針篩選58NBAC文庫(kù),對(duì)得到的陽(yáng)性BAC119H12進(jìn)行進(jìn)一步的分析,從中分離得到長(zhǎng)度為6.2kb與EI＃44P17同源的基因組片段,對(duì)其進(jìn)行Shotgun測(cè)序,根據(jù)測(cè)序結(jié)果利用GENESCAN和GeneFinder對(duì)啟動(dòng)子分別進(jìn)行了預(yù)測(cè),兩者的預(yù)測(cè)結(jié)果一致,都包含了編碼該前體蛋白的