Bt殺蟲毒素Cry3A與黃粉蟲中腸BBMV結(jié)合特性的研究.pdf

1、Cry3A蛋白是蘇云金芽孢桿菌在芽胞產(chǎn)生時(shí)期分泌的一種δ內(nèi)毒素，可以特異性殺死鞘翅目昆蟲。本研究通過表達(dá)含有α-胰凝乳蛋白酶酶切位點(diǎn)的Cry3A突變體蛋白Cry3Am，獲得Cry3A毒蛋白殺蟲活性核心片段aCry3A，驗(yàn)證Cry3A毒素致死過程中多聚體離子通道的存在，探究Cry3A毒素非核心區(qū)域α1-α3的作用，并尋找增加Cry3A殺蟲活性的辦法。
　　具體方法如下:將實(shí)驗(yàn)室保存的pET28a-cry3am質(zhì)粒轉(zhuǎn)入感受態(tài)細(xì)胞，表達(dá)

2、突變體Cry3Am3蛋白;用α-胰凝乳蛋白酶對(duì)Cry3Am進(jìn)行酶切后獲得了55kD的有毒核心片段;參考鱗翅目昆蟲刷狀緣膜囊泡(BBMV)的MgCl2沉降提取法，成功分離到了黃粉蟲的BBMV;通過Western Blot對(duì)Cry3A會(huì)在BBMV上形成多聚體蛋白通道假說進(jìn)行驗(yàn)證;將毒素與黃粉蟲復(fù)合配方飼料混合飼喂給剛孵化的黃粉蟲幼蟲，評(píng)價(jià)突變體蛋白Cry3Am的致死性，探究非核心區(qū)域α1-α3片段的作用。其結(jié)果為化學(xué)發(fā)光后Western B

3、lot形成的照片中活性片段aCry3A在110kD，165kD，225kD區(qū)域形成了陰影;在飼養(yǎng)復(fù)合飼料中混合0.12％毒素的情況下，Cry3Am的致死率為22.6％，aCry3A的致死率為24.1％，Cry3A的致死率為3.7％。
　　本文通過對(duì)Cry3A與黃粉蟲中腸BBMV結(jié)合特性的研究發(fā)現(xiàn)Cry3A毒素在致死過程中會(huì)形成多聚體蛋白通道，破壞昆蟲中腸細(xì)胞滲透壓平衡，Cry毒素非核心區(qū)域α1-α3片段對(duì)多聚體蛋白通道的形成沒有任