桑樹中三個(gè)氧化酶相關(guān)基因的克隆、序列分析及表達(dá).pdf

1、外界逆境脅迫會(huì)使得植物體內(nèi)會(huì)產(chǎn)生大量活性氧而植物本身的代謝也會(huì)產(chǎn)生大量的活性氧，如果植物體內(nèi)的活性氧不能及時(shí)清除，將會(huì)嚴(yán)重毒害植物的生長(zhǎng)和發(fā)育。我國(guó)是桑樹的起源中心，其中不少資源都具有果用價(jià)值、藥用價(jià)值、經(jīng)濟(jì)價(jià)值等。因而，開展桑樹氧化酶基因和過氧化物酶基因克隆、功能驗(yàn)證及分析，不僅可以使桑樹氧化酶基因和過氧化物酶基因在分子水平被我們認(rèn)識(shí)到其在桑樹不同條件下的表達(dá)調(diào)控情況，認(rèn)識(shí)到桑樹貝殼杉烯氧化酶、桑樹過氧化物酶12以及桑樹伯胺氧化酶在桑

2、樹中的作用和功能；而且為以后能夠獲得抵抗外界不良環(huán)境的桑樹品種以及獲得高產(chǎn)量高優(yōu)質(zhì)的桑樹資源打下基礎(chǔ)。
　　1、桑樹貝殼杉烯氧化酶基因克隆研究和對(duì)它們的表達(dá)分析及序列分析
　　通過桑樹cDNA文庫(kù)以及軟件的應(yīng)用和各種實(shí)驗(yàn)技術(shù)，本文首次獲得了1838 bp的片段的桑樹貝殼杉烯氧化酶基因并命名為 MmKO，含有開放讀碼框長(zhǎng)為1551 bp，編碼516個(gè)氨基酸的蛋白，預(yù)測(cè)桑樹貝殼杉烯氧化酶的蛋白質(zhì)分子質(zhì)量為58.563kD，等電點(diǎn)

3、為7.917。屬于p450超級(jí)家族。并與其他物種編碼貝殼杉烯氧化酶的氨基酸進(jìn)行同源性比對(duì)和其他物種的貝殼杉烯氧化酶的基因序列進(jìn)行進(jìn)化樹分析。定量PCR結(jié)果表明，與正常生長(zhǎng)環(huán)境相比，MmKO基因在干旱、鹽、ABA、SA四種非生物環(huán)境脅迫條件下，其表達(dá)調(diào)控水平都在不同時(shí)間點(diǎn)上會(huì)有上調(diào)的變動(dòng)趨勢(shì)。
　　2、桑樹過氧化物酶12基因的克隆、序列分析及誘導(dǎo)表達(dá)分析
　　通過桑樹 cDNA文庫(kù)以及軟件的應(yīng)用和各種實(shí)驗(yàn)技術(shù)，得到一段編碼桑樹

4、過氧化物酶12（MmPOD12）基因的一段序列，獲得含有完整開放閱讀框的cDNA長(zhǎng)1482 bp，1個(gè)完整的開放閱讀框序列長(zhǎng)度為789 bp，編碼對(duì)應(yīng)的氨基酸殘基個(gè)數(shù)為350個(gè)。預(yù)測(cè)其桑樹過氧化物酶12蛋白質(zhì)分子質(zhì)量為37.004 kD，等電點(diǎn)為7.044。屬于過氧化物酶家族基因。在氨基酸的同源性比對(duì)中，MmPOD12基因在各物種間具有一定的保守性，也有差異性，和川桑保持比較接近的親緣關(guān)系。熒光定量PCR：MmPOD12基因的表達(dá)水平在

5、干旱、鹽、ABA、SA脅迫條件下都會(huì)產(chǎn)生不同成都的調(diào)控變化。
　　3、桑樹伯胺氧化酶2基因的克隆、序列分析及誘導(dǎo)表達(dá)分析
　　通過已構(gòu)建的桑樹幼葉 cDNA文庫(kù)以及軟件的應(yīng)用和各種實(shí)驗(yàn)技術(shù)，獲得的桑樹伯胺氧化酶2含有完整開放閱讀框的cDNA長(zhǎng)2597bp，含有的開放閱讀框序列比較完整并且長(zhǎng)度為2364bp，編碼氨基酸蛋白數(shù)量是787個(gè)。預(yù)測(cè)其桑樹伯胺氧化酶2蛋白質(zhì)分子質(zhì)量為87.53 kD，等電點(diǎn)為6.545。屬于銅胺氧化酶