與茶葉香氣形成相關(guān)的三個內(nèi)源糖苷酶基因的克隆和原核表達.pdf

1、獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈的學位論文是本人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特另tlDi：l以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得安徽農(nóng)業(yè)大學或其他教育機構(gòu)的學位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝立二。日、o學位論文作者簽名：簽字日期：年月日學位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學位論文作者完全了解安徽農(nóng)業(yè)大學有關(guān)保留、使

2、用學位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復印件和電子文件，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)安徽農(nóng)業(yè)大學可以將學位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存、匯編學位論文(保密的學位論文在解密后適用本授權(quán)書)。學位論文作者簽名：——簽字日期：年月日學位論文作者畢業(yè)后去向：工作單位：通信地址：指導教師簽名：簽字日期：年月日電話：郵編：摘要茶樹是我圍重要的經(jīng)濟作物，香氣是衡量茶葉品質(zhì)好壞

3、的關(guān)鍵因素。條樹葉片中的單萜烯醇和芳香族醇等揮發(fā)性組分豐要是以糖苷形式存在，且以櫻草糖苷和葡萄糖苷為豐。糖苷類物質(zhì)是茶樹在牛長發(fā)育過程中形成的次級代謝產(chǎn)物，與這類糖苷的合成與水解相關(guān)的酶類豐要有B一櫻草糖苷酶、B一葡萄糖苷酶I、B一葡萄糖苷酶II等。糖苷類香氣前體被內(nèi)源糖苷酶水解后釋放出的揮發(fā)性苷元，不儀是茶葉香氣的物質(zhì)基礎(chǔ)，也參與條樹對病蟲害的防御反應?？寺〖氨磉_茶葉香氣形成途徑中的關(guān)鍵內(nèi)源酶類，對于深入了解茶葉香氣形成機理，豐富和完

4、善茶葉加工和茶園管理理論與技術(shù)，促進抗病與高香茶樹良種的培育都具有重要的理論意義和應用價值。本文利用課題組前期從茶樹葉片中純化出兩種與茶葉葡萄糖苷類香氣前體水解相關(guān)的B一葡萄糖苷酶的cDNA全長序列，以及NCBI網(wǎng)站GeneBank中已登錄的B一櫻草糖苷酶序列，分別設(shè)計了原核表達引物，采用RT—PCR技術(shù)，從茶樹葉片中分別對各基因的編碼區(qū)進行全長擴增。將擴增片段克隆到pMDl8T上并進行序列測定，測序結(jié)果分別與原序列比較，顯示克隆得到的

5、序列一致性達到99％以上。通過牛物信息學分析，茶樹B一櫻草糖苷酶(Pri)基因cDNA全長序列為1729bp，開放閱讀框1524bp，編碼507個氨基酸，分子量為5704kD；13一葡萄糖苷酶I(GluI)基因cDNA全長序列為2337bp，開放閱讀框1896bp，編碼632個氨基酸，分子量為6915kD；3葡萄糖苷酶II(GluII)基因cDNA全長序列為2215bp，開放閱讀框1887bp，編碼629個氨基酸，分子量為6887kD。

6、系統(tǒng)進化分析表明，這三個內(nèi)源糖苷酶基因都與已知的gglucosidase基因親緣關(guān)系較近，其中GluI和GluⅡ與葡萄中的gglucosidase基因相似性最高，而Pri與茶樹中的13glucosidase基因相似性最高，并且與GluI和GluII關(guān)系較遠。茶樹內(nèi)源糖苷酶相關(guān)基因在原核中表達，通過選用表達載體pET一32a()和宿主菌Rosetta(DE3)pLysS對茶樹中B一櫻草糖苷酶(Pri)、3葡萄糖苷酶I(GluI)、3葡萄糖