雞源高遷移率族蛋白B1與J亞群禽白血病病毒復(fù)制關(guān)系的研究.pdf

1、雞源高遷移率族蛋白Bl與J亞群禽白血病病毒復(fù)制關(guān)系的研究ResearchonTheRelationshipBetweenChickenHighMobilityGroupB1ProteinandAvianLeukosisVirusSubgroupJReplication研究生：朱明月導(dǎo)師：錢(qián)琨副教授秦愛(ài)建教授資助項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(3l101814)公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(xiàng)項(xiàng)目(201203055)教育部高等學(xué)校博士點(diǎn)基金(20

2、113250120003)江蘇省高校自然科學(xué)研究項(xiàng)目(11KJB230003)江蘇省優(yōu)勢(shì)學(xué)科項(xiàng)目揚(yáng)州大學(xué)二O一四年揚(yáng)州大學(xué)碩士學(xué)位論文基因的載體質(zhì)粒作為標(biāo)準(zhǔn)品，將鑒定正確的chHMGBl基因的T載體質(zhì)粒進(jìn)行10倍梯度稀釋，用Real—timePCR方法擴(kuò)增chHMGBl基因標(biāo)準(zhǔn)曲線，建立絕對(duì)定量Real—timePCR方法。并利用建立的方法檢測(cè)一日齡雛雞體內(nèi)組織臟器以及實(shí)驗(yàn)室常用禽源細(xì)胞中chHMGBl基因的正常表達(dá)水平，從而為進(jìn)一步研

3、究雞源高遷移率族蛋白B1在家禽疾病免疫調(diào)節(jié)和炎癥過(guò)程中的生物學(xué)作用提供了一種快速、可靠的檢測(cè)方法。2ALvJ感染細(xì)胞與組織臟器中chHMGB1與病毒基因的動(dòng)態(tài)變化ALV—J感染禽源CEF、DFl和HDl1細(xì)胞，利用熒光定量PCR、間接免疫熒光和WesternBlot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)感染過(guò)程中chHMGBl與病毒基因和蛋白水平的動(dòng)態(tài)表達(dá)情況。熒光定量PCR結(jié)果顯示，隨著感染時(shí)間增加，不同禽源細(xì)胞中ALV—J復(fù)制明顯。在病毒感染過(guò)程中，DFl細(xì)胞中

4、的chHMGBl基因呈現(xiàn)出lh上調(diào)，6h下調(diào)，12h上調(diào)，24h、48h及72h處于下調(diào)狀態(tài)，于96h再次上調(diào)；CEF細(xì)胞中的chHMGBl基因在1h上調(diào)，6h下調(diào)，12h、24h、48h、72h及96h均呈現(xiàn)上調(diào)；HDll細(xì)胞中1h與6h處于下調(diào)狀態(tài)，12h呈現(xiàn)上調(diào)，24h和48h基因下調(diào)，72h和96基因上調(diào)。間接免疫熒光結(jié)果顯示，隨著感染時(shí)間增加，病毒熒光逐漸增強(qiáng)，但同時(shí)也發(fā)現(xiàn)在不同細(xì)胞中，chHMGBl蛋白仍位于胞核中，未岡病毒

5、感染而發(fā)生蛋白遷移變化。WesternBlot檢測(cè)細(xì)胞中chHMGBl含量結(jié)果，與熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果基本一致。ALVJ感染SPF雞1、28、56、84、112和140日齡腎臟和肝臟組織中的Real—timePCR檢測(cè)結(jié)果表明，在腎臟中ehHMGBl與病毒基因的變化趨勢(shì)基本一致，而在肝組織中chHMGBl基因在28天達(dá)到表達(dá)的峰值，然后迅速下降維持在正常水平，病毒基因的表達(dá)一直處于一個(gè)波動(dòng)的狀態(tài)。ALVJ感染雞外周血單核細(xì)胞的Real