植物(芹菜)葉片吡哆醛還原酶來源分析.pdf

1、維生素B6(VB6)是一種水溶性維生素,游離型為吡哆醇(Pyridoxine,PN)、吡哆醛(Pyridoxal,PL)和吡哆胺(Pyridoxamine,PM),相應(yīng)磷酸酯形式為磷酸吡哆醇(Pyridoxine-5’-phosphate,PNP)、磷酸吡哆醛(Pyridoxal-5’-phosphate,PLP)和磷酸吡哆胺(Pyridoxamine-5’-phosphate,PMP)。其中PLP是VB6的主要輔酶形式,具有重要的生理

2、功能,除參與多種氨基酸的代謝反應(yīng)外,還涉及多種物質(zhì)的合成和代謝反應(yīng)。在生物體中,存在兩種PLP合成途徑,一種是從頭合成途徑(denovoPathway),另一種是補(bǔ)救合成途徑(SalvagePathway),植物和微生物可以從頭合成PLP,而動物則需要從外界攝取VB6通過補(bǔ)救途徑合成機(jī)體所需PLP。其中,吡哆醛還原酶(PyridoxalReductase,PLR)是一種重要的酶,催化還原PL生成PN,維持PL在生物體內(nèi)的動態(tài)平衡,具有重

3、要生理作用。
　　在對植物中VB6代謝酶的研究過程中發(fā)現(xiàn),芹菜葉片需經(jīng)過一段時間的水浴(37℃,6h)以后,才能檢測出PLR的催化活性。本課題以芹菜葉際為研究對象,研究吡哆醛還原酶的來源和基本性質(zhì)。
　　實驗采用采用苯肼衍生方法,在410nm處,檢測PL和苯肼生成的有色絡(luò)合物含量,測定芹菜葉片中吡哆醛還原酶(PyridoxalReductase,PLR)活性,并確定PLR的主要來源,結(jié)果顯示芹菜葉際的PLR活性主要來源于芹菜

4、葉片表面附著微生物。
　　在無菌操作環(huán)境中,對芹菜葉際表面微生物進(jìn)行分離、計數(shù),確定儲藏過程中芹菜葉片表面微生物的變化情況,結(jié)果表明:PLR主要來源于真菌,在相同菌濃度下,PLR活性的強(qiáng)弱依次為真菌>細(xì)菌>放線菌。
　　結(jié)果顯示:該酶的最適催化溫度為37℃,最適催化pH為7.5。在35℃~45℃條件下,該酶顯示出較高的活性,高于45℃時,隨著溫度的升高酶活損失加快;在pH7~8.5范圍內(nèi)酶活力較大,在pH6.5時酶活性降低為