三眠蠶誘導技術及其發(fā)育相關蛋白質組的研究.pdf

1、用抗保幼激素類藥物處理可以誘導四眠蠶成為三眠蠶，三眠蠶繭絲具有纖度細而均勻、強伸度好的特性，可以繅制高檔優(yōu)質細旦生絲，是開發(fā)特種用途生絲的理想原料，具有較高的經濟價值和利用價值。本文通過用抗保幼激素類藥物金鹿三眠素處理普通四眠蠶，在獲得三眠蠶的基礎上，利用凝膠電泳及生物質譜技術，對家蠶血液和脂肪體的差異蛋白質進行了分析，以探討抗保幼激素對家蠶發(fā)育調控的分子機理。取得的實驗結果如下:
　　 1.以多化性家蠶品種P50為材料，探討抗

2、保幼激素誘導三眠蠶的技術體系。結果表明，以400ppm濃度藥液對家蠶進行添食處理，三眠蠶的誘導效果最好;3齡處理區(qū)和4齡處理區(qū)的誘導率分別為94％和96％;三眠蠶齡期縮短，體質增強;繭絲纖度分別為1.224D和0.785D。
　　 2.應用建立的三眠蠶誘導技術，對6個家蠶品種的誘導效果進行了分析。結果表明，三眠蠶的誘導效果及生長發(fā)育與家蠶品種、處理時期有很大關系，表現為二化性雜交品種誘導成績高于多化性雜交品種，中系品種高于日系品

3、種。在春秋兩季蠶的比較中發(fā)現，秋蠶的繭質成績不如春蠶，但是繭絲纖度較細，3齡處理區(qū)和4齡處理區(qū)繭絲纖度最細分別可達1.079D和0.803D。綜合分析發(fā)現，在供試的6個品種中，“兩廣二號”、“秋豐×白玉”、“白玉×秋豐”3個品種比較適合于誘導、生產三眠蠶。
　　 3.用400ppm濃度抗保幼激素處理4齡起蠶，處理后72小時后，提取處理組和對照組的血液與脂肪體蛋白，利用1-DE/MS技術進行分離與鑒定，結果在血液蛋白質差異性條帶中

4、檢測到82個候選蛋白，并鑒定了其中26個組分，分別屬于17種蛋白質和蛋白質亞基。并且發(fā)現，處理組中30kD和70kD蛋白質組分比較豐富;血液中存在溶酶體硫醇還原酶IP30前體1型和2型，可能與三眠蠶抗病性有關。其次，在脂肪體蛋白質差異條帶中檢測到了49個候選蛋白，鑒定了其中的12個組分，主要包括熱激蛋白、貯藏蛋白以及與基因轉錄、翻譯有關的酶類和轉錄因子等。
　　 4.在1-DE/MS分析基礎上，對處理組和對照組的脂肪體蛋白質進行

5、了2-DE分析，結果檢測到表達量差異在2倍以上的蛋白質組分有62個，表達差異在3倍以上的蛋白質組分有21個，其中特異性表達蛋白質斑點有6個。進一步對表達差異在3倍以上的蛋白質斑點進行了膠內酶切和質譜分析，結果成功鑒定了18個蛋白質組分，其中與家蠶蛻皮變態(tài)密切相關的有30kD蛋白、熱激蛋白Hsp90、蛻皮激素氧化酶、蛻皮激素磷酸磷酸酯酶、醛酮還原酶、家蠶幼蟲血清蛋白、煙堿型乙酰膽堿受體α4亞基2亞型前體和絲氨酸蛋白酶抑制劑等，并探討了這些