細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白在多潛能干細(xì)胞向前脂肪細(xì)胞定向中的作用研究.pdf

1、復(fù)旦大學(xué)碩士學(xué)位論文細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白在多潛能干細(xì)胞向前脂肪細(xì)胞定向中的作用研究院系:專業(yè):姓名:導(dǎo)師:導(dǎo)師小組成員:生物醫(yī)學(xué)研究院生物化學(xué)與分子生物學(xué)胡玲玲湯其群教授黃海艷講師李希副教授于敏副教授馬端教授碩士學(xué)位論文中文摘要細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白在多潛能干細(xì)胞向前脂肪細(xì)胞定向中的作用研究中文摘要脂肪組織是人體重要的能量貯存器官。當(dāng)能量攝取大于消耗時(shí)，就容易產(chǎn)生肥胖，導(dǎo)致脂肪組織體積的增大。脂肪組織體積的增大，一方面是由于脂肪細(xì)胞數(shù)目的增多另一

2、方面是由于脂肪細(xì)胞體積的增大。脂肪細(xì)胞起源于血管基質(zhì)中多潛能干細(xì)胞，這類干細(xì)胞具有自我更新和多向分化的潛能，在合適的條件下，可以分化為脂肪細(xì)胞、肌肉細(xì)胞、軟骨細(xì)胞和成骨細(xì)胞等中胚層來源的細(xì)胞。從多潛能干細(xì)胞到脂肪細(xì)胞的發(fā)育可以分為三個(gè)階段:l)向脂肪細(xì)胞系的定向2)有絲分裂克隆擴(kuò)增3)終末分化。目前對(duì)于前脂肪細(xì)胞到成熟脂肪細(xì)胞的分化研究的比較深入，而對(duì)于多潛能干細(xì)胞向前脂肪細(xì)胞定向的過程了解甚少。在本課題中，我們主要通過蛋白質(zhì)組學(xué)的方法

3、來篩選在多潛能干細(xì)胞向前脂肪細(xì)胞定向過程發(fā)揮作用的關(guān)鍵因子并進(jìn)行機(jī)制的研究，彌補(bǔ)這一部分研究的空白。Tang等研究表明骨形成蛋白BMP24都能促進(jìn)C3HIOTI2多潛能干細(xì)胞向前脂肪細(xì)胞定向，主要是通過與BMPRIA結(jié)合，激活Smad和p38信號(hào)通路從而導(dǎo)致多潛能干細(xì)胞向前脂肪細(xì)胞的定向。但是對(duì)于Smad和p38信號(hào)通路激活后調(diào)節(jié)哪些關(guān)鍵基因而導(dǎo)致多潛能干細(xì)胞向前脂肪細(xì)胞定向并不明確。通過蛋白質(zhì)組學(xué)研究，我們發(fā)現(xiàn)與未處理的細(xì)胞相比，用B

4、MPZ誘導(dǎo)定向的C3HIOTI2細(xì)胞中有8個(gè)蛋白表達(dá)上調(diào)用BMP4處理后有28個(gè)蛋白上調(diào)而其中有5個(gè)蛋白是BMPZ或者BMP4處理后表達(dá)皆上調(diào)10倍以上的蛋白質(zhì)。在這5個(gè)蛋白質(zhì)中有3個(gè)是細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白:賴氨酞氧化酶(lox)、晶體蛋白aB(erystallinalphaB)和腫瘤翻譯調(diào)控蛋白1(tptl)。我們從蛋白質(zhì)水平進(jìn)行了驗(yàn)證，確認(rèn)了這三個(gè)蛋白在BMP24誘導(dǎo)定向的C3HIOTI2細(xì)胞中表達(dá)明顯增力日。為了進(jìn)一步研究篩選出的lo

5、x、tPtl和crystalinaB與BMP信號(hào)通路的關(guān)系，我們利用RNA干擾方法下調(diào)特定蛋白質(zhì)(Smad4和P38MAPK)阻斷Soad和p38信號(hào)通路，觀察Smad和p38信號(hào)通路對(duì)lox、tptl和crystalinaB三種骨架相關(guān)蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果顯示下調(diào)Smad4蛋白水平能夠抑制lox和crystallinaB的表達(dá)，但P38下調(diào)以后對(duì)lox和crystaninaB的表達(dá)的抑制作用相對(duì)較弱。說明Smad信號(hào)通路在10x和cr