細胞骨架相關蛋白在多潛能干細胞向前脂肪細胞定向中的作用研究.pdf

1、復旦大學碩士學位論文細胞骨架相關蛋白在多潛能干細胞向前脂肪細胞定向中的作用研究院系:專業(yè):姓名:導師:導師小組成員:生物醫(yī)學研究院生物化學與分子生物學胡玲玲湯其群教授黃海艷講師李希副教授于敏副教授馬端教授碩士學位論文中文摘要細胞骨架相關蛋白在多潛能干細胞向前脂肪細胞定向中的作用研究中文摘要脂肪組織是人體重要的能量貯存器官。當能量攝取大于消耗時，就容易產生肥胖，導致脂肪組織體積的增大。脂肪組織體積的增大，一方面是由于脂肪細胞數(shù)目的增多另一

2、方面是由于脂肪細胞體積的增大。脂肪細胞起源于血管基質中多潛能干細胞，這類干細胞具有自我更新和多向分化的潛能，在合適的條件下，可以分化為脂肪細胞、肌肉細胞、軟骨細胞和成骨細胞等中胚層來源的細胞。從多潛能干細胞到脂肪細胞的發(fā)育可以分為三個階段:l)向脂肪細胞系的定向2)有絲分裂克隆擴增3)終末分化。目前對于前脂肪細胞到成熟脂肪細胞的分化研究的比較深入，而對于多潛能干細胞向前脂肪細胞定向的過程了解甚少。在本課題中，我們主要通過蛋白質組學的方法

3、來篩選在多潛能干細胞向前脂肪細胞定向過程發(fā)揮作用的關鍵因子并進行機制的研究，彌補這一部分研究的空白。Tang等研究表明骨形成蛋白BMP24都能促進C3HIOTI2多潛能干細胞向前脂肪細胞定向，主要是通過與BMPRIA結合，激活Smad和p38信號通路從而導致多潛能干細胞向前脂肪細胞的定向。但是對于Smad和p38信號通路激活后調節(jié)哪些關鍵基因而導致多潛能干細胞向前脂肪細胞定向并不明確。通過蛋白質組學研究，我們發(fā)現(xiàn)與未處理的細胞相比，用B

4、MPZ誘導定向的C3HIOTI2細胞中有8個蛋白表達上調用BMP4處理后有28個蛋白上調而其中有5個蛋白是BMPZ或者BMP4處理后表達皆上調10倍以上的蛋白質。在這5個蛋白質中有3個是細胞骨架相關蛋白:賴氨酞氧化酶(lox)、晶體蛋白aB(erystallinalphaB)和腫瘤翻譯調控蛋白1(tptl)。我們從蛋白質水平進行了驗證，確認了這三個蛋白在BMP24誘導定向的C3HIOTI2細胞中表達明顯增力日。為了進一步研究篩選出的lo

5、x、tPtl和crystalinaB與BMP信號通路的關系，我們利用RNA干擾方法下調特定蛋白質(Smad4和P38MAPK)阻斷Soad和p38信號通路，觀察Smad和p38信號通路對lox、tptl和crystalinaB三種骨架相關蛋白表達的影響。結果顯示下調Smad4蛋白水平能夠抑制lox和crystallinaB的表達，但P38下調以后對lox和crystaninaB的表達的抑制作用相對較弱。說明Smad信號通路在10x和cr