2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡(jiǎn)介

1、副豬嗜血桿菌病是由副豬嗜血桿菌(Haemophilus parasuis,HPS)引起的以纖維素性漿膜炎、多發(fā)性關(guān)節(jié)炎、胸膜炎和腦膜炎為特征的一種細(xì)菌性傳染病,給全球養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大經(jīng)濟(jì)損失。HPS感染豬后會(huì)引起全身性炎癥和敗血癥,但其致病機(jī)理并不是很清楚。NOD1/2受體在識(shí)別病原微生物中發(fā)揮著重要的作用。NOD1/2通過接頭分子RIP2,激活下游的NF-κB和/或MAPKs信號(hào)通路,調(diào)控炎癥反應(yīng)的發(fā)生。本課題組之前的研究已證明HPS

2、感染PK-15細(xì)胞可以激活TLRs介導(dǎo)的NF-κB和MAPKs(P38/JNK)信號(hào)通路并調(diào)控炎癥因子的分泌。在本研究中,我們進(jìn)一步探討胞質(zhì)內(nèi)的模式識(shí)別受體NOD1/2在HPS感染PK-15細(xì)胞引起炎癥反應(yīng)中的作用,并探索NOD1/2-RIP2信號(hào)通路與NF-κB和MAPKs的激活及其下游炎癥因子的關(guān)系。具體內(nèi)容如下:
  1.HPS感染PK-15細(xì)胞上調(diào)NOD2蛋白表達(dá)和RIP2磷酸化水平
  通過Western Blot

3、方法檢測(cè)HPS感染PK-15細(xì)胞后NOD1和NOD2的變化,結(jié)果發(fā)現(xiàn),HPS感染PK-15細(xì)胞后能夠顯著上調(diào)NOD2的表達(dá),并呈感染時(shí)間和劑量依賴性,而NOD1并不隨著HPS感染時(shí)間和劑量的提高而變化,提示HPS感染PK-15細(xì)胞后可能通過NOD2誘導(dǎo)天然免疫反應(yīng)。隨后,我們進(jìn)一步分析HPS感染后NOD1/2的下游信號(hào)分子RIP2的表達(dá)和磷酸化水平的變化,發(fā)現(xiàn)HPS感染能誘導(dǎo)RIP2的磷酸化,表明HPS感染PK-15后能夠激活NOD1/

4、2-RIP2信號(hào)通路。
  2.NOD1/2-RIP2參與HPS感染PK-15細(xì)胞激活NF-κB而不參與激活MAPKs信號(hào)通路
  分別用合成的干擾分子Si-NOD1、Si-NOD2、和Si-RIP2轉(zhuǎn)染PK-15細(xì)胞,利用NF-κB熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)檢測(cè)HPS感染PK-15細(xì)胞中NF-KB的啟動(dòng)子活性,結(jié)果發(fā)現(xiàn),轉(zhuǎn)染Si-NOD1、Si-NOD2、和Si-RIP2均能顯著下調(diào)NF-κB的啟動(dòng)子活性;為了進(jìn)一步研究NF-KB與

5、NOD1/2-RIP2的相關(guān)性,我們又通過Western Blot檢測(cè)P65的磷酸化水平,結(jié)果發(fā)現(xiàn),轉(zhuǎn)染Si-NOD1、Si-NOD2、和Si-RIP2均能顯著下調(diào)P65的磷酸化蛋白的表達(dá);然而,Si-NOD1、Si-NOD2、和Si-RIP2卻不影響P38、JNK和ERK蛋白的磷酸化水平,提示HPS感染PK-15細(xì)胞能夠通過NOD1/2-RIP2激活NF-κB,但NOD1/2-RIP2不參與激活MAPKs信號(hào)通路。
  3.NO

6、D1/2-RIP2參與HPS感染PK-15細(xì)胞產(chǎn)生CCL4、CCL5和IL-8
  分別用合成的干擾分子Si-NOD1、Si-NOD2、和Si-RIP2轉(zhuǎn)染PK-15細(xì)胞,通過Real-time PCR檢測(cè)CCL4、CCL5和IL-8 mRNA的表達(dá)。結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染Si-NOD1、 Si-NOD2、和Si-RIP2均能顯著下調(diào)CCL4、CCL5和IL-8 mRNA的表達(dá),提示NOD1/2-RIP2參與了HPS感染PK-15細(xì)胞產(chǎn)生

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