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文檔簡介
1、本論文在活體水平驗證豬肝臟組織特異性TTR基因啟動子的活性及組織特異性。本研究構(gòu)建由豬肝臟特異性TTR基因啟動子驅(qū)動BGL1基因表達(dá)的轉(zhuǎn)基因小鼠,通過RT-PCR、Western Blot等技術(shù)研究TTR基因啟動子能夠驅(qū)動外源基因BGL1表達(dá)及β-葡萄糖苷酶的活性。主要研究成果如下:
1.通過原核顯微注射技術(shù)共得到4只轉(zhuǎn)基因首建鼠,其中3只雄性鼠(A、B、C),1只雌性鼠(D)。對獲得的4只首建鼠分別建系進(jìn)行研究,最終B首建鼠
2、建系成功,共獲得5代能穩(wěn)定遺傳外源基因的轉(zhuǎn)基因仔鼠,F(xiàn)5代陽性率達(dá)到90%以上;從F0-F3代外源基因拷貝數(shù)在逐漸增加,F(xiàn)3代拷貝數(shù)達(dá)112.56。
2.RT-PCR檢測TTR基因啟動子能夠驅(qū)動BGL1基因表達(dá),并且經(jīng)Western Blot證實能夠在轉(zhuǎn)基因陽性鼠的肝臟組織中表達(dá)相應(yīng)的蛋白質(zhì),而其余組織(心臟、脾臟、肺、腎臟、腸、肌肉、脂肪)均沒有表達(dá)。
3.利用β-葡萄糖苷酶(β-Glucosidase,β-GC)
3、活性測定試劑盒分別測定轉(zhuǎn)基因鼠與野生型鼠肝臟組織中的β-葡萄糖苷酶活性,結(jié)果表明:轉(zhuǎn)基因小鼠肝臟中的β-葡萄糖苷酶活力顯著高于野生型小鼠。
4.分別測定轉(zhuǎn)基因鼠與野生型鼠肝臟重量指數(shù)(liver weight index,LWI),對肝臟組織切片進(jìn)行HE染色分析和EVG染色分析、生長曲線分析,結(jié)果表明:外源基因的表達(dá)并未引起轉(zhuǎn)基因小鼠肝臟組織的病變,沒有對轉(zhuǎn)基因小鼠個體造成不良影響。
5.成功制備抗扣囊復(fù)膜孢酵母菌β
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