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文檔簡介
1、抗生素在臨床上的不合理或不正當(dāng)使用導(dǎo)致細菌耐藥問題日益嚴峻。對細菌耐藥性進行監(jiān)測是有效控制耐藥性和指導(dǎo)臨床合理用藥的基礎(chǔ),而制定耐藥性判定標準是規(guī)范耐藥性監(jiān)測的必要條件。美國、歐盟以及日本等發(fā)達國家都制定了一系列細菌耐藥判定和檢測標準。我國主要參考的是美國CLSI中的標準。然而我國細菌耐藥程度與美國細菌耐藥程度并不完全一致,故我國迫切需要制定適合我國耐藥性情現(xiàn)狀的耐藥判定標準。作為一種重要的人畜共患菌,沙門菌對氟喹諾酮類藥物的耐藥性在我
2、國日益突出,然而豬源沙門菌恩諾沙星的耐藥性判定卻無標準可依,因此建立豬源沙門菌恩諾沙星的折點值對耐藥性監(jiān)測和臨床用藥具有重要的指導(dǎo)意義。本課題參考美國CLSI,歐盟EUCAST等標準規(guī)定的方法方法,建立了豬沙門菌恩諾沙星野生型折點和藥效學(xué)折點。
1、豬沙門菌恩諾沙星的野生型折點值(COwT)
本研究使用科瑪嘉顯色培養(yǎng)基和PCR方法對230株豬源病原菌進行特異性鑒定。230株豬源病原菌接種到科瑪嘉顯色培養(yǎng)基,挑
3、取紫色菌落,初步鑒定出214株豬源沙門菌,再用特異性基因invA進行PCR特異性檢測,最終確定214株病原菌全為豬源沙門菌。
用非線性回歸法制定野生型折點值。采用CLSI中規(guī)定的瓊脂稀釋法測定恩諾殺星對豬源沙門菌的最低抑菌濃度(MIC)。繪制MIC柱狀分布圖,其中野生型菌株的MIC柱狀圖符合以二為底的對數(shù)正態(tài)分布。用SigmaStat3.5軟件根據(jù)非線性回歸分析方法測定野生型菌株的MIC對數(shù)正態(tài)分布數(shù)據(jù),選擇與實際測得的菌
4、株總數(shù)差異最小的MIC分布作為野生型菌株MIC分布。根據(jù)相關(guān)規(guī)定,95%野生型菌株的MIC即為野生型折點值。結(jié)果表明,當(dāng)MIC的取值范圍在0.125-4μg/mL時,野生型菌株共有183株,與實際測得的182株菌只相差一株菌,差異最小。另外31株菌為耐藥性豬沙門氏菌,耐藥率為14.5%。根據(jù)野生型MIC柱狀圖測得的豬沙門氏菌對恩諾沙星的野生型折點為≤2μg/mL,包括了100%的野生型豬源沙門氏菌。
2、豬沙門菌恩諾沙星藥
5、效學(xué)折點值(COPPD)
用高效液相法測定豬血漿中的藥時數(shù)據(jù)。選取12頭3月齡健康豬,0.5 mL/kg臀部肌肉注射恩諾沙星溶液。取不同時間點的血漿進行檢測。檢測方法為血漿用乙腈處理后,用反相高效色譜法測定恩諾沙星的濃度,選擇的流動相是10%甲醇,10%乙腈,0.03 M乙酸銨和0.02M檸檬酸。之后,用3p97軟件分析藥動學(xué)數(shù)據(jù),結(jié)果表明,藥時數(shù)據(jù)符合一室吸收模型。
只有處于游離狀態(tài)的藥物才具有活性,與蛋白
6、結(jié)合的藥物會影響到活性藥物濃度,因而本課題用透析法測定了恩諾沙星在豬血漿中的蛋白結(jié)合率。結(jié)果表明,藥物濃度與血漿蛋白結(jié)合率的關(guān)系較大,200μg/ml-2000μg/ml的蛋白結(jié)合率范圍為41.4%-56.6%。
用Monte Carlo模擬方法制定藥效學(xué)折點值。AUC0-24/MIC是豬沙門菌恩諾沙星藥效學(xué)折點的有效參數(shù),用Crystal Ball軟件得出不同AUC0-24/MIC與MIC取值的累積百分率。當(dāng)AUC0-2
7、4/MIC為125,相臨兩個MIC值差異較大時,取前一個MIC值作為藥效學(xué)折點值。結(jié)果表明,豬沙門菌恩諾沙星的藥效學(xué)折點為≤1μg/mL。根據(jù)CLSI相關(guān)規(guī)定,當(dāng)缺乏臨床型折點值時,測定的藥效學(xué)折點值即為敏感性折點值。所以本研究制定出的豬源沙門氏菌對恩諾沙星的敏感性折點值為≤1μg/ml。
綜上所述,本課題參考了CLSI中規(guī)定的標準方法,制定出了豬沙門菌恩諾沙星的野生型折點和藥效學(xué)折點,并根據(jù)CLSI相關(guān)規(guī)定制定出了豬沙門
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