螺旋藻硫酸多糖(SPS)提純工藝優(yōu)化及體外抗氧化和抗稻瘟霉活性研究.pdf

1、針對(duì)螺旋藻多糖的特性，對(duì)目前常用于測(cè)定硫酸基團(tuán)含量的BaCl2-明膠法的反應(yīng)與測(cè)定條件等作了較系統(tǒng)的研究。BaCl2-明膠法測(cè)定SO42-含量標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備條件為：以K2O4為標(biāo)準(zhǔn)品，線性范圍為0～40μg，測(cè)定體系中HCl濃度為0.10mol/L，測(cè)定波長(zhǎng)為360nm。并且當(dāng)反應(yīng)溫度和時(shí)間分別在10～40℃和10～40min范圍時(shí)，它們對(duì)BaCl2-明膠法測(cè)定SO42-含量的影響不大。分別以離心管、15N測(cè)定管和安培瓶為水解裝置，以螺

2、旋藻多糖中硫酸基團(tuán)含量測(cè)定值的重復(fù)性和準(zhǔn)確性為評(píng)價(jià)指標(biāo)，選擇了一種適用于螺旋藻多糖水解的容器，并對(duì)水解時(shí)的溫度和時(shí)間進(jìn)行了單因素考察。確定以安培瓶為水解裝置，水解溫度和時(shí)間分別為95℃和4h。利用改進(jìn)后的BaCl2-明膠法測(cè)定5個(gè)螺旋藻多糖中硫酸基團(tuán)的含量，平均值為1.17％，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD=0.08％，說明所建方數(shù)據(jù)重復(fù)性好、可信度較高。
　　 以提取率為考察指標(biāo)，根據(jù)球面設(shè)計(jì)原理對(duì)螺旋藻多糖的提取工藝進(jìn)行了優(yōu)化。結(jié)果表明

3、，當(dāng)工藝為水料比30ml/g、74℃浸提6h時(shí)，提取效果較佳，理論提取率為3.89％。根據(jù)改進(jìn)后的工藝條件提取螺旋藻多糖，3個(gè)重復(fù)的平均提取率為4.02％，與理論值相近。將粗提物濃縮5倍后，以多糖回收率、純度及硫酸基團(tuán)含量為技術(shù)參數(shù)，對(duì)醇沉體系的pH和醇沉?xí)r間進(jìn)行了單因素考察。結(jié)果表明，當(dāng)醇沉回收體系pH約3.5，沉淀時(shí)間為18h時(shí)，雖然多糖回收率略低，但回收多糖的純度和硫酸基團(tuán)含量均相對(duì)較高。
　　 綜合考慮蛋白去除率，以及多

4、糖回收率和硫酸基團(tuán)含量等技術(shù)指標(biāo)，通過對(duì)SeVag法和TCA法脫蛋白效果的比較分析，研究建立了一種適用于螺旋藻水提物中硫酸多糖提取的脫蛋白方法。即用Sevag法脫蛋白2次，蛋白脫除率約為51％，多糖回收率和回收多糖中硫酸基團(tuán)含量分別為76.3％和1.3％。諾增加脫蛋白次數(shù)雖能進(jìn)一步脫除雜蛋白，但硫酸基團(tuán)含量下降明顯。收集脫蛋白后多糖(SPS-CE)，利用QSepharoseFastFlow柱進(jìn)一步分離得到4個(gè)硫酸基團(tuán)含量依次為20.7％

5、、11.7％、8.2％和13.0％的硫酸多糖組分，分別記為SPS-Ⅰ、SPS-Ⅱ、SPS-Ⅲ和SPS-Ⅳ。其中，SPS-Ⅰ和SPS-Ⅳ純度較高，分別為90.6％和84.6％。IR光譜特征分析結(jié)果表明，SPS-Ⅰ中硫酸基團(tuán)位于單糖殘基C-4位的垂直位置，與其它3種SPS中硫酸基團(tuán)在單糖殘基上的鍵連接位置及類型有所不同。
　　 自由基清除實(shí)驗(yàn)表明，4種SPS均表現(xiàn)出一定的體外抗氧化活性。其中，SPS-Ⅳ抗氧化能力最強(qiáng)，對(duì)·OH、O2

6、-和1O2的半清除能力(IC50)依次為48.7、22.1和66.7μg/ml，分別是SPS-CE的3.36，33.1和2.76倍，是螺旋藻多糖中最主要的抗氧化組分。鑒于自由基與腫瘤發(fā)生與轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系，這或許可以從一個(gè)方面提示SPS-Ⅳ可能具有抗腫瘤功效。因此，作者進(jìn)一步采用稻瘟霉模型對(duì)SPS抗腫瘤活性進(jìn)行了初步篩選。結(jié)果表明，SPS-Ⅳ在一定濃度范圍內(nèi)(187.50～375μg/ml)對(duì)稻瘟霉菌絲生長(zhǎng)具有強(qiáng)變形活性，并且隨著濃度的增