大黃魚(yú)熱激蛋白和海帕西啶蛋白基因的克隆與原核表達(dá)研究.pdf

1、大黃魚(yú)（Pseudosciaena crocea）是我國(guó)沿海網(wǎng)箱養(yǎng)殖的主要對(duì)象之一，在海水養(yǎng)殖上具有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。雖然我國(guó)大黃魚(yú)養(yǎng)殖業(yè)形成了一定的規(guī)模，人工繁殖也已經(jīng)取得成功，并開(kāi)展了大黃魚(yú)的人工放流工作，但至今尚未查清大黃魚(yú)各功能基因的序列結(jié)構(gòu)和遺傳變異狀況。本文以2004年3月采自象山港的網(wǎng)箱養(yǎng)殖大黃魚(yú)為材料，進(jìn)行大黃魚(yú)有關(guān)功能基因的初步研究，為今后進(jìn)行大黃魚(yú)分子標(biāo)記輔助育種(MAS)奠定基礎(chǔ)。 熱

2、激蛋白（Heat Shock Protein, HSP）是指生物細(xì)胞在應(yīng)激原特別是環(huán)境高溫誘導(dǎo)下所生成的一組蛋白質(zhì)。除環(huán)境高溫以外，其他應(yīng)激源如缺氧、寒冷、感染、饑餓、創(chuàng)傷、中毒等也能誘導(dǎo)細(xì)胞生成HSP。因此，HSP又稱(chēng)應(yīng)激蛋白（stress protein, Sp），但習(xí)慣上仍稱(chēng)HSP。HSP是目前發(fā)現(xiàn)的非特異性的主要分子伴侶蛋白之一，直接參與并促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)從初生鏈的合成到多亞基復(fù)合體折疊、裝配的整個(gè)生物過(guò)程。 海帕西啶（

3、Hepatic bactericidal protein，Hepcidin）當(dāng)初是由兩個(gè)研究小組各自在尋找抗微生物多肽的研究中發(fā)現(xiàn)的。Krause等從人類(lèi)血液中純化得到海帕西啶，故將其命名為肝臟表達(dá)抗微生物多肽（LEAP-1），而Park 等是從人類(lèi)尿中分離得到的，將其命名為海帕西啶。鐵代謝紊亂引起的疾患是人類(lèi)最常見(jiàn)的疾病。生理?xiàng)l件下,人體主要通過(guò)調(diào)控小腸鐵吸收保持機(jī)體鐵穩(wěn)態(tài)。最近關(guān)于hepcidin 的研究顯示,這種肝臟合成的已知具有

4、抗菌功能的多肽是控制小腸鐵吸收,以及調(diào)節(jié)機(jī)體鐵穩(wěn)態(tài)的鐵調(diào)節(jié)激素。肝臟hepcidin 高表達(dá)可能是許多貧血包括炎癥和慢性疾病性貧血的根本原因,而hepcidin 表達(dá)障礙可能是許多鐵過(guò)負(fù)荷類(lèi)疾病的起因。 通過(guò)設(shè)計(jì)特異引物，對(duì)從大黃魚(yú)肝臟提取的總RNA逆轉(zhuǎn)錄合成的cDNA模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，獲到大小分別為1.7Kb的熱激蛋白（HSP）目的基因與250bp的海帕西啶蛋白（Hepcidin）目的基因,分別將其克隆，并構(gòu)建了表達(dá)載體pS