快速檢測(cè)食品中微生物方法的進(jìn)展

1、<p>　　快速檢測(cè)食品中微生物方法的進(jìn)展</p><p>　　隨著人們生活水平不斷提高，食品安全問題越來越受到人們的重視，微生物對(duì)食品的污染問題也相應(yīng)地備受關(guān)注。在食品生產(chǎn)、加工、儲(chǔ)存、運(yùn)輸、銷售等各個(gè)環(huán)節(jié)中都有污染微生物的可能。一旦污染，微生物將大量繁殖而引起食品腐敗變質(zhì)，或?qū)е率吃葱愿腥竞褪澄镏卸尽Ｌ貏e是近年來隨著環(huán)境污染的加劇和生態(tài)平衡的不斷破壞，可導(dǎo)致人類感染的致病菌的種類越來越多，病原微生物

2、對(duì)人類的威脅越來越大。傳統(tǒng)的檢驗(yàn)方法，主要包括形態(tài)檢查和生化方法，其準(zhǔn)確性、靈敏性均較高，但涉及的實(shí)驗(yàn)較多、操作煩瑣、需要時(shí)間較長(zhǎng)、準(zhǔn)備和收尾工作繁重，而且要有大量人員參與。所以，準(zhǔn)確、省時(shí)、省力和省成本的快速檢驗(yàn)方法是社會(huì)的迫切需要。本文對(duì)食品中微生物的快速檢測(cè)方法進(jìn)展情況進(jìn)行綜述，以利于對(duì)食品進(jìn)行篩選和檢測(cè)，最終達(dá)到預(yù)防腸道傳染病和食物中毒的發(fā)生的目的。 </p><p><b>　　1、即用型紙片

3、法 </b></p><p>　　3M公司的perrifilmTMPlate系列微生物測(cè)試片，可分別檢測(cè)菌落總數(shù)、大腸菌群計(jì)數(shù)、霉菌和酵母計(jì)數(shù)。由RCP Scientific Inc 公司開發(fā)上市的Regdigel系列，除上述項(xiàng)目外還有檢測(cè)乳桿菌、沙門菌、葡萄球菌的產(chǎn)品，這兩個(gè)系列的產(chǎn)品與傳統(tǒng)檢測(cè)方法之間的相關(guān)性非常好。如用大腸菌群快檢紙片檢測(cè)餐具的表面，操作簡(jiǎn)便、快速、省料，特異性和敏感性與發(fā)酵法符

4、合率高，已經(jīng)被列為國(guó)標(biāo)方法。使用時(shí)應(yīng)正確掌握操作技術(shù)和判斷標(biāo)準(zhǔn)，從而達(dá)到理想的檢測(cè)效果。美國(guó)3M公司生產(chǎn)的PF（Petrifilm）試紙還加入了染色劑、顯色劑，增強(qiáng)了菌落的目視效果，而且避免了熱瓊脂法不適宜受損細(xì)菌恢復(fù)的缺陷。在大腸菌群檢測(cè)方面，國(guó)標(biāo)方法報(bào)告的是MPN值而不是每克食品中的大腸菌群數(shù)，PF法則可以得出精確數(shù)據(jù)。霉菌快速檢驗(yàn)紙片，應(yīng)用于食品檢驗(yàn)中的霉菌具有操作簡(jiǎn)便，僅需36℃培養(yǎng)，不需要低溫設(shè)備；快速，僅需2 d就可觀察結(jié)果

5、，比現(xiàn)在的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法縮短3 d～5 d，大大提高了工作效率。紙片法與國(guó)標(biāo)法在霉菌檢出率上差異無顯著性，且菌落典型，易判定。紙片熒光法利用細(xì)菌產(chǎn)生某些代謝酶或代謝產(chǎn)物的特點(diǎn)而建立的一種酶</p><p>　　2、選擇、鑒定用培養(yǎng)基法 </p><p>　　在培養(yǎng)基中加入特異性的生化反應(yīng)底物、抗體、熒光反應(yīng)底物、酶反應(yīng)底物等，可使目標(biāo)培養(yǎng)物的選擇、分離、鑒定一次性完成。如生物一梅里埃公司

6、的BP+RPF（兔血漿+纖維蛋白原）培養(yǎng)基，可在24 h內(nèi)鑒定金黃色葡萄球菌。Merk公司的chromocult Coliform Agar培養(yǎng)基上，大腸桿菌為墨綠色至紫色菌落，沙門菌為淡綠色至藍(lán)綠色菌落。檸檬酸桿菌和克雷伯桿菌為橙紅色至紅色菌落，其他腸道菌為無色菌落。 </p><p><b>　　3、免疫學(xué)技術(shù) </b></p><p>　　免疫學(xué)技術(shù)通過抗原和抗

7、體的特異性結(jié)合反應(yīng)，再輔以免疫放大技術(shù)來鑒別細(xì)菌。免疫方法的優(yōu)點(diǎn)是樣品在進(jìn)行選擇性增菌后，不需分離，即可采用免疫技術(shù)進(jìn)行篩選。由于免疫法有較高靈敏度，樣品經(jīng)增菌后可在較短的時(shí)間內(nèi)達(dá)到檢出度，抗原和抗體的結(jié)合反應(yīng)可在很短時(shí)間內(nèi)完成。如采用免疫磁珠法可有效地收集、濃縮神奈川現(xiàn)象陽性的副溶血性弧菌，可顯著提高環(huán)境樣品及食品中病原性副溶血性弧菌的檢出率。膠體金免疫層析法能快速、靈敏檢測(cè)金黃色葡萄球菌，應(yīng)用膠體金免疫層析法檢測(cè)食品中的沙門菌，簡(jiǎn)便

8、快速，無需特殊儀器設(shè)備，適合現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)之用。ATP生物發(fā)光法是近年發(fā)展較快的一種用于食品生產(chǎn)加工設(shè)備潔凈度檢測(cè)的快速檢測(cè)方法。利用ATP生物發(fā)光分析技術(shù)和體細(xì)胞清除技術(shù)，測(cè)量細(xì)菌ATP和體細(xì)胞ATP， 細(xì)菌ATP的量與細(xì)菌數(shù)成正比，用ATP本論文由無憂論文網(wǎng)www.51lunwen.com整理提供生物發(fā)光分析技術(shù)檢測(cè)肉類食品細(xì)菌污染狀況或食品器具的現(xiàn)場(chǎng)衛(wèi)生學(xué)檢測(cè)，都能夠達(dá)到快速適時(shí)的目標(biāo)。微型自動(dòng)熒光酶標(biāo)分析法（mini VIDAS）是利

9、用酶聯(lián)熒光免疫分析技術(shù)，通過抗原抗體特異反應(yīng)，分離出目標(biāo)菌，由特殊儀器根據(jù)熒光的強(qiáng)弱自動(dòng)判斷樣品的</p><p>　　4、細(xì)菌直接計(jì)數(shù)法 </p><p>　　主要包括流式細(xì)胞儀（flow cytometry，F(xiàn)CM）和固相細(xì)胞計(jì)數(shù)（solid phase cytometry，SPC）法。FCM通常以激光作為發(fā)光源，經(jīng)過聚焦整形后的光束垂直照射在樣品流上，被熒光染色的細(xì)胞在激光束的照射下

10、產(chǎn)生散射光和激發(fā)熒光。光散射信號(hào)基本上反映了細(xì)胞體積的大?。粺晒庑盘?hào)的強(qiáng)度則代表了所測(cè)細(xì)胞膜表面抗原的強(qiáng)度或其核內(nèi)物質(zhì)的濃度，由此可通過儀器檢測(cè)散射光信號(hào)和熒光信號(hào)來估計(jì)微生物的大小、形狀和數(shù)量。流式細(xì)胞計(jì)數(shù)具有高度的敏感性，可同時(shí)對(duì)目的菌進(jìn)行定性和定量。目前已經(jīng)建立了細(xì)菌總數(shù)、致病性沙門菌、大腸埃希氏菌等的FCM檢驗(yàn)方法。固相細(xì)胞計(jì)數(shù)可以在單個(gè)細(xì)胞水平對(duì)細(xì)菌進(jìn)行快速檢測(cè)。濾過樣品后，存留的微生物在濾膜上進(jìn)行熒光標(biāo)記，采用激光掃描設(shè)備自

11、動(dòng)計(jì)數(shù)。每個(gè)熒光點(diǎn)可直觀地由通過計(jì)算機(jī)驅(qū)動(dòng)的流動(dòng)臺(tái)連接到ChemScan上的落射熒光顯微鏡來檢測(cè)，尤其對(duì)于生長(zhǎng)緩慢的微生物，檢測(cè)用時(shí)短使該方法明顯優(yōu)于傳統(tǒng)平板計(jì)數(shù)法。 </p><p>　　5、全自動(dòng)微生物分析系統(tǒng)（AMS） </p><p>　　AMS是一種由傳統(tǒng)生化反應(yīng)及微生物檢測(cè)技術(shù)與現(xiàn)代計(jì)算機(jī)技術(shù)相結(jié)合，運(yùn)用概率最大近似值模型法進(jìn)行自動(dòng)微生物檢測(cè)的技術(shù)，可鑒定由環(huán)境、原料及產(chǎn)品中分

12、離的微生物。AMS僅需4 h～18 h即可報(bào)告結(jié)果，以常規(guī)法鑒定細(xì)菌，只能得到是或不是某種菌，要想知到是哪種菌還要做大量、煩瑣的生化試驗(yàn)，而AMS則可以直接報(bào)告是什么菌。法國(guó)生物梅里埃集團(tuán)公司出品的VitekAMS自動(dòng)微生物檢測(cè)系統(tǒng)屬當(dāng)今世界上最為先進(jìn)、自動(dòng)化程度最高的細(xì)菌鑒定儀器之一。Vitek對(duì)細(xì)菌的鑒定是以每種細(xì)菌的微量生化反應(yīng)為基礎(chǔ)，不同種類的Vitek試卡（檢測(cè)卡）含有多種的生化反應(yīng)孔，可達(dá)30種，可鑒定405種細(xì)菌。用AMS