非發(fā)酵菌及檢驗(yàn)課件

1、非發(fā)酵革蘭陰性桿菌p335,程曦,復(fù)習(xí),疑為傷寒沙門菌感染，應(yīng)如何進(jìn)行微生物學(xué)檢驗(yàn)？Widal test 的定義和結(jié)果解釋。根據(jù)生化反應(yīng)和O抗原，可將志賀菌屬怎樣分群？請(qǐng)解釋什么是“外斐試驗(yàn)”。,內(nèi)容,概述假單胞菌屬（銅綠假單胞菌和嗜麥芽窄食單胞菌）不動(dòng)桿菌屬（鮑曼不動(dòng)桿菌）軍團(tuán)菌屬,要求,1.掌握非發(fā)酵革蘭陰性菌（非發(fā)酵菌）的概念、特點(diǎn)及非發(fā)酵菌的初步辨認(rèn)和初步分群方法；掌握銅綠假單胞菌的生物學(xué)特性及細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)方法。2

2、.熟悉嗜麥芽窄食單胞菌和不動(dòng)桿菌屬的生物學(xué)特性及細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)方法。3.了解常見非發(fā)酵菌在醫(yī)院感染中的意義，了解軍團(tuán)菌屬的生物學(xué)特性及檢驗(yàn)方法。,,定義：非發(fā)酵菌(nonfermenters) 革蘭陰性桿菌， 指一大群不發(fā)酵葡萄糖或僅以氧化形式利用糖類的需氧或兼性厭氧、無(wú)芽胞的革蘭陰性桿菌。,主要特點(diǎn)：,菌屬菌種多，在分類學(xué)上分別屬于不同的科、屬和種 ；大多數(shù)不發(fā)酵糖類或僅以氧化形式利用糖類；大多數(shù)為專性需氧菌；主要存在于外界環(huán)境

3、中，大多數(shù)為條件致病菌，是目前醫(yī)院感染的主要病原菌。,常見菌屬,假單胞菌屬(Pseudomonas)不動(dòng)桿菌屬(Acinetobacter)窄食單胞菌屬(Stenotrophmonas)伯克菌屬（Burkholderia）產(chǎn)堿桿菌屬(Alcaligenes)無(wú)色桿菌屬(Achromobacter)莫拉菌屬(Moraxella),黃桿菌屬(Flavobaterium)艾肯桿菌屬(Eikenella) 土壤桿菌屬(Ag

4、robacterium)黃單胞菌屬(Xanthomonas)叢毛單胞菌屬(Comamonas)金氏桿菌屬(Kingella)食酸菌屬（Acidovorax）,鑒定系統(tǒng),假單胞菌屬 (Pseudomonas),,一、分類 P335,假單胞菌屬包括200多個(gè)菌種，尤以銅綠假單胞菌（P.aeruginosa）多見。惡臭假單胞菌生物變種(P.putica biovars)斯氏假單胞菌（P.stutizeri）曼多辛假單胞菌(P.

5、mendocina)產(chǎn)堿假單胞菌(P.alcaligenes)假產(chǎn)堿假單胞菌(P.pseudoalcaligenes),二、概述部分（自學(xué)）,生物學(xué)特性致病物質(zhì)和所致疾病微生物學(xué)檢驗(yàn)藥物敏感試驗(yàn),三、銅綠假單胞菌,（一）細(xì)菌特性1. 形態(tài)染色革蘭陰性桿菌，菌體細(xì)長(zhǎng)，且長(zhǎng)短不一，有時(shí)呈球桿狀或絲狀，單個(gè)、成對(duì)或短鏈狀排列，無(wú)芽胞，有莢膜，菌體一端有單鞭毛。,2. 培養(yǎng)特性專性需氧，最適生長(zhǎng)溫度25~30℃，可在42℃生長(zhǎng)，

6、4℃不生長(zhǎng)。營(yíng)養(yǎng)要求不高，普通培養(yǎng)基上均能生長(zhǎng)。產(chǎn)生多種色素，常見有綠膿素和熒光素。在液體培養(yǎng)基中呈表面菌膜生長(zhǎng)，菌液上層為藍(lán)綠色。,,普通瓊脂平板：菌落圓形、大小不一、邊緣不整齊、扁平稍隆起、濕潤(rùn)光滑、常成融合狀態(tài)。血瓊脂平板：菌落大而扁平、有金屬光澤、有生姜味，菌落周圍有透明溶血環(huán)。麥康凱瓊脂平板：菌落微小、無(wú)色透明，中心常呈綠色。,3. 生化反應(yīng),氧化酶＋ O/F試驗(yàn)為氧化型（O）精氨酸雙水解酶試驗(yàn)＋硝酸鹽還原試驗(yàn)＋

7、。,4.抗原構(gòu)造 P338,O抗原： 2種，成分分別是外膜蛋白（屬特異性）和脂多糖（型特異性）。H抗原黏液抗原（S抗原）菌毛抗原,1. 致病因子 （1）侵襲力： 粘附素、莢膜多糖 （2）毒素： 外毒素、內(nèi)毒素 （3）綠膿素 （4）侵襲性酶類：彈性蛋白酶、磷脂酶C,（二）臨床意義 P338,2. 所致疾病,醫(yī)院感染的主要病原菌。燒傷創(chuàng)面感染、皮膚感染、肺部感染、泌尿道感染、中耳炎、腦膜炎、心內(nèi)膜炎、敗血

8、癥、急性角膜穿孔等。也可引起小兒類似沙門菌和霍亂樣的嚴(yán)重腹瀉。,多重耐藥，能天然抗多種藥物耐藥機(jī)制：酶、菌體成分、外排泵、外膜滲透性改變、生物膜等,（三）微生物學(xué)檢驗(yàn),,,,三、其它假單胞菌,,,不動(dòng)桿菌屬(Acinetobacter) P341,歸屬奈瑟氏菌科。根據(jù)DNA-DNA雜交和營(yíng)養(yǎng)特征分為32個(gè)基因種，但只有10個(gè)基因種16種不動(dòng)桿菌有菌名，臨床常見：基因種1：醋酸鈣不動(dòng)桿菌(A.calcoaceticus)基因種2

9、：鮑曼不動(dòng)桿菌(A.baumannii) 基因種4：溶血不動(dòng)桿菌(A.haemolyticus)基因種5：瓊氏不動(dòng)桿菌(A.junii)基因種7：約氏不動(dòng)桿菌(A.johnsonii)基因種8：洛菲不動(dòng)桿菌(A.1woffi),一、分類,1. 形態(tài)染色 革蘭陰性桿菌，多為球桿狀，單個(gè)存在或成雙排列，無(wú)芽胞，無(wú)鞭毛，粘液型菌株有莢膜。,二、細(xì)菌特性,2. 培養(yǎng)特性專性需氧，營(yíng)養(yǎng)要求不高，最適生長(zhǎng)溫度為37℃，但有些菌株可

10、在42℃生長(zhǎng)。 血瓊脂平板：菌落圓形、光滑、邊緣整齊、灰白色，多數(shù)菌株不溶血，有些β溶血。麥康凱瓊脂平板：菌落呈粉紅色，但在SS瓊脂培養(yǎng)基上只有部分菌株生長(zhǎng)。,3. 生化反應(yīng),氧化酶－ O/F試驗(yàn)為氧化型（O）硝酸鹽還原試驗(yàn)－,三、臨床意義,條件致病菌，醫(yī)院感染的常見病原菌。 可從各種臨床標(biāo)本如血液、尿液、膿液、呼吸道分泌物及腦脊液等中分離出來(lái)。,鮑曼不動(dòng)桿菌 P342,對(duì)全部氨基青霉素，第一、二代頭孢菌素，第一代喹諾酮類抗生

11、素天然耐藥。,四、微生物學(xué)檢驗(yàn) P172,窄食（寡養(yǎng)）單胞菌屬 P343(Stenotrophmonas）,寡養(yǎng)單胞菌目前5個(gè)種，最重要的是嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌（S.maltophilia） 。其分類經(jīng)過(guò)了兩次改名：假單胞菌屬（嗜麥芽假單胞菌）→黃單胞菌屬（嗜麥芽黃單胞菌）→窄食單胞菌屬（嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌）。,,一、分類,1. 形態(tài)染色 革蘭陰性桿菌，有一端或兩端叢鞭毛，多數(shù)在三根以上， 無(wú)芽胞，無(wú)莢

12、膜，可產(chǎn)生菌毛。,二、細(xì)菌特性,專性需氧，營(yíng)養(yǎng)要求不高，最適生長(zhǎng)溫度35℃，4℃不生長(zhǎng)。血瓊脂平板：菌落血平板上呈淡紫綠色，有氨味；麥康凱瓊脂平板：菌落呈淡黃色。,2. 培養(yǎng)特性,3. 生化反應(yīng),氧化酶試驗(yàn)－ O/F試驗(yàn)：麥芽糖＋，但葡萄糖氧化分解可陰性 硝酸鹽還原試驗(yàn)＋ 賴氨酸脫羧酶＋ DNA酶＋,廣泛分布于自然界中，亦可寄居于人的呼吸道和腸道中，為條件致病菌。臨床感染標(biāo)本中，除銅綠假單胞菌之外最常見的非發(fā)酵革蘭陰性桿菌

13、。,三、臨床意義,耐藥性強(qiáng),對(duì)亞胺培南天然耐藥,軍團(tuán)菌屬 P375（Legionella）,一、分類,軍團(tuán)菌科，軍團(tuán)菌屬。已命名的菌種共有45種，64個(gè)血清型。現(xiàn)已命名了39種軍團(tuán)桿菌，至少19種是人類肺炎的病原。其中最常見病原體為嗜肺軍團(tuán)菌(占病例的85%~90%)。,二、細(xì)菌特性,1. 形態(tài)染色革蘭陰性桿菌，有端鞭毛或側(cè)鞭毛，動(dòng)力陽(yáng)性。無(wú)芽胞，無(wú)莢膜,免疫熒光染色,革蘭染色,菌落掃描電鏡圖,2.培養(yǎng)特性需氧菌，首次分離需5%C

14、O2，營(yíng)養(yǎng)要求嚴(yán)格，常用培養(yǎng)基為緩沖活性炭-酵母瓊脂培養(yǎng)基（BCYE）。生長(zhǎng)緩慢，在BCYE上3～5d形成直徑1～2mm，圓形凸起、灰白色有光澤的菌落，初期外觀呈刻花玻璃樣花紋，繼續(xù)培養(yǎng)消失。,軍團(tuán)菌屬,3.生化反應(yīng)觸酶陽(yáng)性部分菌株氧化酶陽(yáng)性液化明膠不分解糖類不還原硝酸鹽脲酶陰性嗜肺軍團(tuán)菌能水解馬尿酸鹽多數(shù)菌株β-內(nèi)酰胺酶陽(yáng)性,4.抵抗力,對(duì)熱和常用化學(xué)消毒劑敏感。蒸餾水中可存活100天以上，下水道污水中可存活1年。

15、,三、臨床意義,廣泛存在于水和土壤中，在人工管道的水源中常見，如醫(yī)院空調(diào)器的冷卻水、淋浴頭和輔助呼吸機(jī)等產(chǎn)生的氣溶膠顆粒中常有此菌，是醫(yī)院感染的主要病原菌之一。臨床表現(xiàn)多種多樣，主要有流感樣型（輕癥型）、肺炎型（重癥型）和肺外感染三種臨床類型。最常見的是肺炎型。,軍團(tuán)菌屬,致病性與免疫性,嗜肺軍團(tuán)菌病,軍團(tuán)菌屬,微生物學(xué)檢查與防治原則：,根據(jù)病情采集痰液、氣管分泌物、血液及病理組織標(biāo)本等。用熒光抗體染色鏡檢或培養(yǎng)后做生化鑒定（p247

16、）。,定時(shí)清潔空調(diào)，加強(qiáng)監(jiān)測(cè)消毒,用紅霉素、慶大霉素等治療,軍團(tuán)菌為細(xì)菌性肺炎的前3位病原之一，早已存在于我們生活中，并對(duì)人群構(gòu)成了潛在威脅,軍團(tuán)菌病是1976年在美國(guó)費(fèi)城首次被發(fā)現(xiàn)的急性呼吸道傳染病，當(dāng)時(shí)在退伍軍人大會(huì)上暴發(fā)流行，導(dǎo)致221人發(fā)病，34人死亡。此后，世界上許多國(guó)家均有軍團(tuán)菌病的發(fā)生，每次暴發(fā)都引起世人的廣泛關(guān)注。世界衛(wèi)生組織由此把本病列入疾病傳報(bào)范圍。我國(guó)自1982年在南京首次證實(shí)軍團(tuán)菌病例以來(lái)，全國(guó)已有多起軍團(tuán)菌病的

17、散發(fā)與暴發(fā)流行的報(bào)道。,水是軍團(tuán)菌的自然棲息地,目前，隨著百姓生活水平的逐步提高，城市中高層建筑的日益增多，熱水管、噴水池、空調(diào)、淋浴及加濕器等設(shè)備的普及，這些都有可能增加軍團(tuán)菌病的危險(xiǎn)性。因而，軍團(tuán)菌病在國(guó)際上已被視為“現(xiàn)代生活文明病”。國(guó)際化標(biāo)準(zhǔn)組織（ISO）早已把水源中軍團(tuán)菌的檢測(cè)作為水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)細(xì)菌檢驗(yàn)的一部分，世界上許多國(guó)家的賓館、飯店都必須有“軍團(tuán)菌檢驗(yàn)合格”的證明。我國(guó)也于2006年3月頒布了《公共場(chǎng)所集中空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)衛(wèi)生規(guī)