牛孤雌胚胎凋亡與氧化損傷的研究.pdf

1、卵母細(xì)胞的孤雌激活對(duì)于一系列與卵母細(xì)胞及胚胎相關(guān)的技術(shù)如胞質(zhì)內(nèi)精子注射、核移植等非常重要，然而孤雌激活受激活方法、胚胎培養(yǎng)液、培養(yǎng)氣相環(huán)境等各種因素的制約，卵裂率、囊胚率均較體外受精(IVF)胚胎差，本文就牛孤雌胚胎凋亡與氧化損傷方面展開研究，旨在提高孤雌激活水平，為克隆技術(shù)提供技術(shù)基礎(chǔ)。 1．分別用離子霉素(Ion)+6-DMAP與Ion+放線菌酮(CHX)激活牛卵母細(xì)胞，用TUNEL法檢測孤雌胚胎凋亡發(fā)生的起始、頻率，以及凋

2、亡細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化。結(jié)果顯示，雖然Ion+6-DMAP(ID)組的卵裂率較Ion+CHX(IX)組低，但囊胚率顯著高于IX組。第5 d首先在IX組檢測到TUNEL陽性核，ID組凋亡比IX晚1 d發(fā)生。ID組的凋亡率從第6 d開始到第8 d由8％增加到11％，而IX組則由13％增加到19％，可見二者增長幅度很相近。IX組平均囊胚細(xì)胞數(shù)比ID組顯著減少，但凋亡率卻比ID組高。結(jié)果表明牛孤雌胚胎存在凋亡，但采用Ion聯(lián)合6-DMAP激活牛卵母

3、細(xì)胞，胚胎發(fā)育情況相對(duì)較好一些。 2．在牛卵母細(xì)胞成熟液和胚胎培養(yǎng)液中添加β-巰基乙醇(β-ME)，研究β-ME對(duì)牛卵母細(xì)胞核成熟和孤雌胚胎發(fā)育的影響。牛卵母細(xì)胞體外成熟液中分別添加0.05，0.1，0.15mmol/L β-ME，檢查核成熟率；激活的卵母細(xì)胞分別培養(yǎng)在含0.05，0.1，0.15 mmol/L β-ME的SOF中，或在1-細(xì)胞期、8-16細(xì)胞期、桑葚胚期分別添加0.1 mmol/L β-ME，第168～192