右旋磷霉素生物轉(zhuǎn)化菌篩選方法的建立與應(yīng)用.pdf

1、左旋磷霉素是一種小分子極性抗生素，1969年發(fā)現(xiàn)于弗氏鏈霉菌(Streptomyces fradiae)發(fā)酵液中，其化學(xué)結(jié)構(gòu)簡單、抗菌機(jī)制獨(dú)特、對(duì)革蘭陽性與陰性菌均有作用?，F(xiàn)今，左旋磷霉素已經(jīng)實(shí)現(xiàn)化學(xué)工業(yè)合成。右旋磷霉素是在左旋磷霉素化學(xué)工業(yè)生產(chǎn)過程中產(chǎn)生的無臨床活性的對(duì)映異構(gòu)體，并隨著左旋磷霉素的大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)而近乎1:1的產(chǎn)生。右旋磷霉素的排放主要分為制藥廢水排放與固體堆放，由于制藥廢水中右旋磷霉素濃度較低、成分復(fù)雜，因此更適宜將其

2、無害化降解，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)環(huán)境的修復(fù)，而堆放在庫房當(dāng)中的固體右旋磷霉素總量大、純度高。因此更適宜將其手性生物轉(zhuǎn)化為左旋磷霉素，從而提高生產(chǎn)效益。
　　本文針對(duì)上述兩種應(yīng)用目的，建立了右旋磷霉素生物轉(zhuǎn)化菌篩選方法，包括了TLC-OD570法和α-右旋苯乙胺沉淀法。其分別應(yīng)用于右旋磷霉素降解菌的篩選與右旋磷霉素手性轉(zhuǎn)化菌的篩選。同時(shí)，對(duì)兩種方法進(jìn)行優(yōu)化和精確度、重復(fù)性、穩(wěn)定性的測定以及標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。
　　本文從不同的環(huán)境中采集樣品

3、，篩選得到右旋磷霉素耐受菌株476株，以此作為右旋磷霉素生物轉(zhuǎn)菌株的篩選來源?；谀褪芫暌约皹?gòu)建的檢測方法，對(duì)具有右旋磷霉素耐性的菌株進(jìn)行篩選。篩選得到20株右旋磷霉素降解菌和1株右旋磷霉素手性轉(zhuǎn)化菌。對(duì)具有高效降解右旋磷霉素的菌株A68-32進(jìn)行UV誘變選育，得到突變株UV-35，對(duì)右旋磷霉素的耐受性提高了1.5倍，降解效率提高26.1％，7d對(duì)1.0％的右旋磷霉素降解率達(dá)87.9％。在1.0％的右旋磷霉素培養(yǎng)基中進(jìn)行7天發(fā)酵，右旋