對心肌缺血再灌注心律失常起保護作用藥物的藥理設計試驗

1、對心肌缺血再灌注心律失常起保護作用藥物的藥理設計試驗,演示目錄,背景知識試驗原理試驗方法試驗材料試驗步驟數(shù)據(jù)統(tǒng)計試驗結(jié)果預測討論,背景知識,缺血性心臟病和急性心肌梗死已成為當今威脅人類健康的兩大主要殺手，而心肌缺血損傷和心肌缺血再灌注損傷是導致這兩大病的主要病因。缺血性心臟病是由于血液供應中斷一定時間后（一般30min)就會出現(xiàn)心肌細胞酸中毒，細胞器超微結(jié)構(gòu)改變和功能障礙，導致不可逆性損傷甚至死亡，也稱為缺血損傷。,背景

2、知識,急性心肌梗死是由于血液供應中斷一定時間后（一般30min)，為恢復心肌功能及時提供血液，由于在閉塞的冠動脈再通，缺血區(qū)血運重建后的一段時間內(nèi)，可發(fā)生血壓聚降，導致新功能不全，出現(xiàn)心律失常、猝死等病情惡化現(xiàn)象，也稱為缺血再灌注損傷。,試驗原理,氧自由基(ORG)是心肌細胞呼吸產(chǎn)能過成中的副產(chǎn)物，包括超氧過離子，羥自由基和過氧化氫等。OFR可引起脂質(zhì)的過氧化，降低細胞膜流動性，增加它的通透性，損傷離子泵，引起細胞能量和離子穩(wěn)態(tài)異常，最

3、終導致肌細胞損傷甚至死亡。,試驗原理,正常情況下，有機體存在的超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px)等內(nèi)源性抗氧化防御系統(tǒng)可將OFR 及時清除掉，維持正常的功能。在缺氧情況下，OFR明顯下降而生成的潛能增強，當在恢復供氧時，OFR劇增超過了抗防御系統(tǒng)的清除能力，導致肌細胞損傷甚至死亡。,試驗方法,采用在大鼠開胸結(jié)扎冠狀動脈前降肢30min后，松扎再灌注60造成的心臟缺血再灌注模型，以心電圖監(jiān)測心律失常情況，主要指標

4、以心律出現(xiàn)失常的時間，持續(xù)時間及室性心動過速（VT）、心室顫動（VF）的發(fā)生率，ST段在不同再灌注時間的變化。并測定心肌組織SOD、GSH-PX、及MDA、Ca2+的含量變化。,試驗材料,試驗動物：Wister大鼠60只，雄雌各半220~240g.試驗儀器及用具：心電圖機、內(nèi)切式組織勻漿器、原子吸光光度計、恒流泵、手術(shù)臺及手術(shù)的相關(guān)器具、橡皮管和線。藥品與試劑：試藥復方五加刺注射液（CASI）、烏拉坦、生理鹽水、前列腺素E1、MDA

5、、SOD及GSH-PX測定試劑盒、鈣標準溶液。,試驗步驟,LD50的測定，取LD50的1/3為試樣的最大量。動物分組：將選好的60只大鼠隨機分為假手術(shù)組、模型組、陽性前列腺素E1m ug/kg組和CASI A、 B、 Cmg/kg組（A=1/2B=1/2C），其中每組10只。心肌缺血再灌注模型的制備：給各組大鼠胸腔注射烏拉坦1g/kg進行麻醉，監(jiān)測肢體Ⅱ?qū)?lián)心電圖，分離氣管并插管，開胸后應立即進行人工呼吸機正壓呼吸（頻率54次/mi

6、n流量每100g體重2ml).,試驗步驟,假手術(shù)組冠狀動脈前降肢下穿線不結(jié)扎外，其余各組均結(jié)扎冠狀動脈前降肢。結(jié)扎30min后，松解結(jié)扎線進行再灌注，時間為60min.在松解的同時，各組均以恒流泵經(jīng)股靜脈勻速輸入藥物或生理鹽水。,試驗步驟,心律失常率及ST波段變化測定：通過心電圖機，記錄再灌注30min內(nèi)心律失常出現(xiàn)的時間、持續(xù)時間及室性心動過速（VT）、心室顫動（VF）的發(fā)生率，并記錄15min、30min、60min的ST段時間變

7、化如表1和表2。,試驗步驟,心肌組織勻漿的制備：再灌注60后，各組立即取出心臟，用冰冷生理鹽水沖洗、吸干稱重后以生理鹽水為介質(zhì)，用內(nèi)切式組織勻漿機制10%的心肌勻漿組織備用。,試驗步驟,心肌組織生化指標測定SOD、GSH-PX活力及MDA含量均按試劑盒方法測定計算，心肌細胞內(nèi)Ca含量以Ca標準為標準對照，用原子吸光光度計測定,表3。,數(shù)據(jù)統(tǒng)計方法,心律失常發(fā)生率用X²檢驗、其他數(shù)據(jù)進行組間t檢驗，所得計量資料均以x

8、7;s表示表1，CASI對大鼠心肌缺血再灌注出現(xiàn)心律失常時間、持續(xù)時間及發(fā)生率（ x±s n=10),,,數(shù)據(jù)統(tǒng)計方法,心律失常發(fā)生率用X2檢驗、其他數(shù)據(jù)進行組間檢驗，所得計量資料均以x±s表示表2，CASI對大鼠心肌缺血再灌注ST段抬高程度/mv（ x±s n=10),,數(shù)據(jù)統(tǒng)計方法,心律失常發(fā)生率用X2檢驗、其他數(shù)據(jù)進行組間檢驗，所得計量資料均以x±s表示表3，CASI對大鼠心肌缺血再灌

9、注MDA、 Ca2+的含量及 SOD、GSH-Px活性的影響（ x±s n=10),,,試驗結(jié)果預測,CASI對大鼠缺血再灌注心律失常發(fā)生率及出現(xiàn)時間、持續(xù)時間的影響：假手術(shù)組：未出現(xiàn)任何心律失?，F(xiàn)象；模型組：出現(xiàn)心律失常時間短，持續(xù)時間長，發(fā)生率最高；陽性藥物組和CASI組（A、B、C㎎/㎏）：出現(xiàn)心律失常時間延長，持續(xù)時間明顯縮短，發(fā)生率明顯下降，與模型組比較有差異性顯著。,試驗結(jié)果預測,CASI對大鼠缺血再灌注15

10、min、30min、60min ST段變化的影響： 假手術(shù)組：無明顯改變； 模型組：顯著提高； 陽性藥物組和CASI組（A、B、C㎎/㎏）：應明顯降低ST段的抬高程度，與模型組比較有顯著性差異。,試驗結(jié)果預測,CASI對大鼠缺血再灌注心肌組織中MAD、Ca2﹢含量及SOD、GSH-PX活性的影響：與假手術(shù)組相比，模型組的MAD、 Ca2﹢含量明顯增高，而SOD和GSH-PX活性明顯降低。陽性藥物組和CASI組（A